【摘 要】
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目的克隆人血管内皮生长因子( VEGF165)和血管生成素 1 (Ang 1)基因,建立可分别表达 VEGF165和 Ang 1的中国仓鼠卵巢细胞( CHO)株.方法用 PCR技术,分别从人心脏 cDNA文库中扩
【机 构】
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广东省人民医院医学研究中心,广州,510080
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目的克隆人血管内皮生长因子( VEGF165)和血管生成素 1 (Ang 1)基因,建立可分别表达 VEGF165和 Ang 1的中国仓鼠卵巢细胞( CHO)株.方法用 PCR技术,分别从人心脏 cDNA文库中扩增 VEGF165和 Ang1 cDNA,并定向克隆入真核表达载体 pSecTag2B中.用 Lipofectamine2000将重组质粒转化入 CHO细胞中,用 Zeocin筛选并维持已转化重组质粒的 CHO细胞株.在大肠杆菌 DH10B中扩增转化入 CHO细胞中的重组质粒,行 DNA测序鉴定.用 Western-blot鉴定 CHO细胞中重组 VEGF165和 Ang 1的表达.结果从人心脏 cDNA文库中扩增出 VEGF165和 Ang1 cDNA片段,酶切和测序结果显示,已正确构建重组质粒 pSecTag-VEGF165和 pSecTag-Ang1. 用 Zeocin筛选到候选的 CHO细胞株, DNA测序结果表明, pSecTag-VEGF165和 pSecTag-Ang1已分别成功转化入 CHO细胞中. Western-blot结果显示,在 CHO细胞中表达出可被 VEGF和 Ang 1单抗识别的特异蛋白.结论克隆了 VEGF165和 Ang 1基因,并建立了表达 VEGF165和 Ang 1的 CHO细胞株.
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