DJ-1蛋白对视神经钳夹伤后小鼠视网膜神经节细胞及视功能的影响

• 作 者: 欧阳灵艺 贺涛 邢怡桥
• 机 构: 武汉大学人民医院眼科中心 430060,武汉大学人民医院眼科中心 430060,武汉大学人民医院眼科中心 430060,
• 出 处: 中华眼底病杂志
• 发表日期: 2021年37期
• 关键词: 视神经损伤 视网膜神经节细胞 视网膜电描记术 动物实验 DJ-1蛋白

目的

观察Park7基因编码的DJ-1蛋白对小鼠视神经钳夹损伤（ONC）后视网膜神经节细胞（RGC）及视功能的影响。

方法

健康雄性C57BL/6J小鼠37只和116只分别随机分为正常组、ONC 2 d组、ONC 5 d组、ONC 7 d组和对照组、Park7组、Park7-ONC组、ONC组、绿色荧光蛋白（GFP）-ONC组。ONC 2 d组、ONC 5 d组、ONC 7 d组小鼠分别于建立ONC模型后2、5、7 d处死取材，进行后续实验。Park7组、Park7-ONC组小鼠玻璃体腔注射敲低Park7基因的重组腺相关病毒（rAAV）1 μl，GFP-ONC组小鼠玻璃体腔注射仅带有GFP的rAAV 1 μl；注射后4周观察病毒转染情况。ONC组、Park7-ONC组、GFP-ONC组玻璃体腔注射后23 d，建立ONC模型，建模后5 d取材进行后续实验。视网膜铺片免疫荧光染色观察RGC平均密度变化；全视野闪光视网膜电图检测各组小鼠a波、b波和明视负向反应（phNR）潜伏期及振幅变化和振荡电位（OPs）振幅变化；视动反应（OMR）检测小鼠视敏度；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠视网膜中DJ-1、Bax、B淋巴细胞瘤／白血病-2 （Bcl-2）蛋白相对表达水平。多组间数据比较采用单因素方差分析；组间两两比较采用最小显著差法t检验。

结果

与正常组比较，ONC 2 d组、ONC 5 d组小鼠视网膜DJ-1蛋白相对表达量均显著上升，差异有统计学意义（t=16.610、5.628，P<0.01、<0.05）。病毒转染后4周，Park7组小鼠视网膜RGC层、内丛状层可见强GFP表达。与对照组比较，ONC组小鼠视网膜RGC密度明显下降，差异有统计学意义（t=16.520，P<0.000 ）；与ONC组比较，Park7-ONC组小鼠视网膜RGC密度明显下降，差异有统计学意义（t=6.074，P<0.01 ）。随刺激光亮度增加，对照组小鼠暗适应a波、b波潜伏期逐渐缩短，振幅逐渐增大。刺激光亮度3 cd·s/m²，对照组、Park7组、Park7-ONC组、ONC组、GFP-ONC组小鼠暗适应a波、b波潜伏期及振幅比较，差异均无统计学意义（潜伏期：F= 0.503、2.592，P=0.734、0.068；振幅：F= 0.439、1.451，P=0.779、0.247 ）；与对照组比较，ONC组小鼠Ops、PhNR振幅明显下降，差异有统计学意义（t=15.07、12.80，P<0.000、<0.001）；与ONC组比较，Park7-ONC组小鼠Ops、PhNR振幅明显下降，差异有统计学意义（t=4.042、5.062，P<0.05、<0.01）；各组小鼠PhNR潜伏期比较，差异无统计学意义（F=1.327，P=0.287 ）。与对照组比较，ONC组小鼠视敏度明显下降，差异有统计学意义（t=23.020，P<0.000 ）；与ONC组比较，Park7-ONC组小鼠视敏度明显下降，差异有统计学意义（t＝3.669，P<0.05 ）。Park7组与对照组、Park7-ONC组与ONC组比较，小鼠视网膜中DJ-1蛋白相对表达量均明显下调，差异有统计学意义（t=47.140、26.920，P<0.000、<0.000）；ONC组与GFP-ONC组比较，差异无统计学意义（t= 0.739，P=0.983 ）。与ONC组比较，Park7-ONC组小鼠视网膜中Bax蛋白相对表达量明显升高，Bcl-2蛋白相对表达量明显降低，差异均有统计学意义（t=5.960、9.710，P<0.05、<0.05）；Park7-ONC组Bcl-2/Bax相对表达量比值明显低于ONC组，差异有统计学意义（t=13.620，P<0.01 ）。

结论

敲低Park7基因后其编码的蛋白质DJ-1表达下调，加重ONC模型小鼠RGC损伤以及视网膜电生理反应及视功能下降。