【摘 要】
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查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI,EC5.5.1.6)是甘草黄酮类有效成分生物合成途径中的第二个限速酶,发挥重要的调控作用.本课题组在前期研究基础上,筛选出黄酮高含量甘草
【机 构】
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北京中医药大学生命科学学院,北京102488;华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部,湖北武汉430000;北京市药品检验所,北京102206
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查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI,EC5.5.1.6)是甘草黄酮类有效成分生物合成途径中的第二个限速酶,发挥重要的调控作用.本课题组在前期研究基础上,筛选出黄酮高含量甘草特异对应的CHI基因型,通过基因融合法构建了过表达CHI基因的植物双元表达载体,并通过电转法将其转化到发根农杆菌ACCC10060中,用于侵染甘草子叶和胚轴,获得过表达CHI基因的甘草毛状根系,利用qRT-PCR法测定各甘草毛状根系中CHI基因的拷贝数,并利用UPLC法测定各甘草毛状根系中4种黄酮类化合物的含量.结果显示获得了拷贝数分别为1和5的过表达CHI基因甘草毛状根系,且其总黄酮、甘草苷、甘草素和异甘草素的含量均显著高于野生型毛状根,表明过表达CHI基因能显著提高甘草毛状根中黄酮类化合物的含量.本文为解析CHI基因的功能提供了理论依据,筛选出3个过表达CHI基因甘草毛状根系用于后续扩大培养,可为离体积累甘草黄酮类化合物奠定基础.
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