利用增强型绿色荧光蛋白基因作筛选标记克隆载体的构建及鉴定

• 作 者: 唐金宝 陈永 梁淑娟 王焕芹 李青春
• 机 构: 潍坊医学院基础医学部,山东,潍坊,261042;潍坊医学院免疫学教研室,山东,潍坊,261042
• 出 处: 中国海洋药物
• 发表日期: 2009年2期
• 关键词: 增强型绿色荧光蛋白 大肠杆菌 阳性克隆 筛选载体

目的 构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记的新型pUC18筛选载体.方法 将EGFP基因克隆至pUC18载体的Pst Ⅰ/Hind Ⅲ住点,构建筛选载体pUC18-EGFP,并验证pUC18-EGFP能否利用EG-FP的荧光特性筛选出含基因重组体的阳性克隆.结果 经酶切和基因测序鉴定pUC18-EGFP载体构建正确;在外源基因插入该载体后,对LB氨苄平扳上的绿色菌落进行酶切和基因测序鉴定,结果 证明LB平板上的绿色菌落即为含有重组质粒的克隆.结论 成功构建pUC18-EGFP筛选载体,利用EGFP的绿色荧光可筛选出阳性克隆.