【摘 要】
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目的:克隆结核分枝杆菌Rv1009结构域基因,经序列测定正确后进行融合表达和纯化.方法:采用PCR从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv1009结构域基因,用限制性内切酶消化后插入p
【机 构】
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第四军医大学西京医院检验科,第四军医大学实验动物中心,第四军医大学基础部微生物教研室,第四军医大学西京医院中医科
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目的:克隆结核分枝杆菌Rv1009结构域基因,经序列测定正确后进行融合表达和纯化.方法:采用PCR从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv1009结构域基因,用限制性内切酶消化后插入pUC-19克隆载体中,经测序正确后亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了N端带6个连续组氨酸残基的Rv1009结构域多肽,在变性条件下对目的蛋白进行纯化.结果:获得了结核分枝杆菌Rv1009结构域基因,得到融合6个组氨酸残基的Rv1009结构域多肽,纯化获得的蛋白纯度大于87%.结论:构建了结核分枝杆菌Rv1009结构域基因的重组表达载体,并获得了高纯度的融合表达蛋白,为后续深入研究奠定了基础.
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