【摘 要】
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目的 初步探讨改进转移体内迟发过敏反应检测(trans-vivo delayed type hypersensi tivity assay,Trans-vivo DTH)方法,规范反应条件对器官移植受者免疫状态评估的作用.方法
【机 构】
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北京大学人民医院泌尿外科,北京工业大学精密测试技术与仪器实验室
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目的 初步探讨改进转移体内迟发过敏反应检测(trans-vivo delayed type hypersensi tivity assay,Trans-vivo DTH)方法,规范反应条件对器官移植受者免疫状态评估的作用.方法 C57BL/6小鼠20只,以万能工具显微镜及游标卡尺分别测量小鼠同侧后肢脚掌厚度2次,并计算重复测定误差、可重复性系数和平均变异系数;确定Trans-vivo DTH反应的最适条件,包括注射细胞量、刺激蛋白量、观察时间及血小板污染的影响;建立动物模型:A:阴性对照组5只;B:假手术组20只;C:同系心脏移植组20只;D:异基因心脏移植组20只.经存活实验确定采样时间点后,分别于术后1、4、7、11 d采用改良trans-vivo DTH检测法,RT-PCR法检测受者PBMCs中IL-2 mRNA表达水平,MLC检测细胞增殖水平,评估各组大鼠免疫状态.病理学观察D组大鼠移植心肌及DTH被检小鼠脚掌组织学改变;免疫组织化学检测异基因移植心脏组织中Ki-67蛋白表达及CD3+、CD4+和CD8+ T细胞的浸润程度.结果 重复测量过程中,万能工具显微镜组的重复测定误差及平均变异系数均小于游标卡尺组,具有较优的重测信度.Trans-vivo DTH反应的最适条件为10×106受体PBMCs混合10 μg供体刺激蛋白,24 h后观察结果.Trans-vivo DTH万能工具显微镜测量法于术后第4天出现阳性结果(P＜0.01),较PBMCs IL-2mRNA表达水平及MLC增殖反应更早期预测排斥反应的发生.病理学检查及免疫组织化学染色可见,随术后时间延长,D组移植心肌间质出现弥漫性炎症细胞浸润,并伴有水肿、坏死;Ki-67蛋白表达上调;CD3+、CD4+和CD8+ T细胞数量明显增加.结论 规范后的trans-vivo DTH万能工具显微镜检测法可能作为评估移植受者免疫状态的可靠方法.
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