【摘 要】
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目的 克隆表达驽巴贝虫诊断抗原基因BC48,建立间接ELISA诊断方法.方法 从感染驽巴贝虫的毛驴血液中提取虫体基因组DNA,利用PCR技术扩增BC48基因,将其克隆入表达载体pET-28a,
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫原病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,兰州,730046
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目的 克隆表达驽巴贝虫诊断抗原基因BC48,建立间接ELISA诊断方法.方法 从感染驽巴贝虫的毛驴血液中提取虫体基因组DNA,利用PCR技术扩增BC48基因,将其克隆入表达载体pET-28a,转化大肠埃希菌感受态细胞,用异丙基-D-硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化蛋白.以该蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA诊断方法,对反应条件进行优化,并对该方法的特异性和敏感性进行评价.结果 扩增获得1 272 bp的BC48基因片段.重组表达质粒pET-28a-BC48诱导后获得大小约为Mr 46 000的可溶性融合蛋白,纯化后蛋白浓度为12.98 mg/ml.间接ELISA方法条件优化的结果显示,最佳抗原包被浓度为65 μg/ml,最适血清稀释度为1: 80,该融合蛋白可特异性地与驽巴贝虫感染血清结合,而不与马泰勒虫感染血清及阴性血清反应.使用该方法与镜检法检测17份散养毛驴血清样品,阳性检出率分别为3/17和2/17.结论 以BC48重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可用于马属动物驽巴贝虫病的检测.
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