【摘 要】
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目的 探讨miR-140对缺血性脑卒中水通道蛋白4(Aquaporin4,AQP4)表达水平的影响.方法 通过栓塞大鼠大脑中动脉24 h来建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型;构建包含有人和大鼠的m
【机 构】
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150001 哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科
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目的 探讨miR-140对缺血性脑卒中水通道蛋白4(Aquaporin4,AQP4)表达水平的影响.方法 通过栓塞大鼠大脑中动脉24 h来建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型;构建包含有人和大鼠的miR-140结合位点的AQP4 mRNA 3'非翻译端(3'UTR)的双荧光素酶报告基因质粒,检测miR-140对AQP4 mRNA 3'UTR的靶向作用;培养乳鼠原代星形胶质细胞,建立体外原代星形胶质细胞氧糖剥离(OGD)模型,转染miR-140拟似物(mimics)和miR-140抑制剂(inhibitor)观察过表达和沉默miR-140对AQP4的调控作用;免疫印迹法(Western blot)检测AQP4的表达水平;荧光实时定量PCR(Real-time PCR)检测miR-140的表达水平.结果 与假手术组比较,MCAO模型大鼠脑组织中miR-140表达水平降低(59.3±10.0)％(P<0.05),而AQP4蛋白表达水平升高(1.8±0.3)倍(P<0.05);与对照组比较,原代星形胶质细胞氧糖剥离(OGD)模型miR-140表达水平降低(51.6±15.3)％(P<0.05),而AQP4蛋白表达水平升高(1.7±0.4)倍(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测显示miR-140拟似物能显著降低荧光素酶活性(P<0.05),miR-140抑制剂能显著升高荧光素酶活性(P<0.05);星形胶质细胞中过表达miR-140能够抑制AQP4蛋白表达,与对照组比较过表达miR-140组AQP4蛋白表达水平降低(37.7±16.9)％(P<0.05),沉默miR-140可诱导AQP4蛋白表达水平升高(1.5±0.1)倍(P<0.05).结论 缺血性脑卒中脑组织及星形胶质细胞中miR-140表达水平降低,AQP4表达水平升高;miR-140能够靶向作用于AQP4 mRNA 3'非翻译区来抑制AQP4蛋白的表达.
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