结核分枝杆菌热休克蛋白Hsp70在原核表达载体中的克隆表达与鉴定

• 作 者: 苏洁 蔡宏 朱玉贤
• 机 构: 北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室
• 出 处: 中国人兽共患病学报
• 发表日期: 2006年8期
• 关键词: 结核分枝杆菌 热休克蛋白 载体 克隆 表达与鉴定 Mycobacterium tuberculosis Heat shock protein prokaryot

目的对结核分枝杆菌的一种热休克蛋白Hsp70基因进行克隆，鉴定，并在原核系统中表达。方法以结核杆菌H37Rv菌株基因组DNA为模板，用PCR法对基因Hsp70进行扩增，产物与载体质粒pET-22b（＋）构建表达Hsp70的重组质粒，将此重组质粒先转化到E．coli DH5a内提取质粒，酶切鉴定，再转化入表达宿主E．coli BL21（DE3）PlysS菌株内，对转化菌株以IPTG进行诱导后，破茵，离心，上清进行SDS-PAGE，通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行免疫印迹分析。结果电泳发现转化了