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【摘 要】 随着微生物学的发展，临床对微生物室的依赖日益增强。无菌体液的细菌培养对在检测由细菌引起的感染性疾病方面更具有举足轻重的地位，特别是血液细菌培养对临床更加有意义。近年来，血液细菌培养经历了手工血培养瓶培养、半自动血培养，进而发展成全自动血液培养仪这样一个过程，使培养速度、结果的准确性、病原菌检出的阳性率均大大提高。本文主要对近年来临床血液细菌培养技术的发展现状进行综述分析。
【关键词】 血培养 培养方法 注意事项
血液细菌培养结果是血源性感染诊断和影响治疗决策的重要证据之一。随着医疗技术的飞速发展，血液细菌培养技术也得到快速的发展，现对近年来血液细菌培养技术的发展进行分析。
1 血液中病原菌群现状
当微生物侵入血液迅速繁殖超出机体免疫系统清除这些微生物的能力时形成菌血症或真菌血症。资料显示，菌血症发病率持续增加[1]。目前培养分离出的病原菌革兰阳性菌多为金葡和凝固酶阴性葡萄球菌，革兰阴性杆菌多为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，真菌检出率有上升的势头。
2 血培养的方法
2.1 手工的血液细菌培养方法
2.1.1 传统的血液细菌培养方法常使用自制培养基，进行需氧培养，培养至7日无菌生长还需无菌操作进行盲转至血琼脂和巧克力琼脂平板，若仍无菌生长方可出报告;若分离出可疑致病菌后还需转种至血平板和巧克力琼脂平板，待其生长后才能做抗菌素的敏感实验。此法对细菌检出率低，且不能做厌氧菌培养，培养时间长，容易污染。唯一优势就是成本较低。
2.1.2 手工商业化血液细菌培养方法
手工商业化血液细菌培养基有液体血培养瓶和固液双相血培养瓶，最常采用的是固液双相血培养瓶。采用带有琼脂斜面的固液双相血培养瓶形式，减少了转种环节，不仅可以缩短检出时间，简化操作和减少污染，而且苛氧菌在固体培养基上的生长显著优于液体培养基。即双相培养系统对临床各种需氧菌和兼性厌氧菌有一定的检出能力，但不能检出厌氧菌。双相血液细菌培养需要每天取出培养瓶，人工肉眼仔细观察瓶中液体及琼脂斜面上有无细菌生长，该方法很容易产生对一些菌量少、沉淀生长液体清亮的阳性培养菌的漏判，影响阳性标本检出率和检出时间。
2.2 自动化血液细菌培养系统
传统的血液细菌培养方法存在阳性检出率较低、易污染，检测时间较长等缺点，已远远不能满足临床需求，这就使得快速、准确检测血液中病原微生物的方法应运而生——自动血液细菌培养系统。
2.2.1 自动化血培养仪的工作原理
细菌在生长繁殖和代谢的过程中产生二氧化碳，二氧化碳可引起酸碱度、氧化还原电势等的变化。通过检测细菌生长代谢产生的二氧化碳，如采用放射性14C标记技术，特殊的二氧化碳感受器或均质荧光技术等检测培养基中酸碱度、氧化还原电势等的变化，判断待检标本中细菌的存在。
2.2.2 常用的自动化血培养系统及其性能。
BACTEC460系统是最早的半自动化血培养仪，它比传统培养技术更快捷、灵敏，特别用于结核菌的培养和药敏;BACTEC9000系列全自动血培养的优点为速度快，准确性高，5d培养阳性率为100%（除外分枝杆菌和真菌），假阳性率低、系统安全可靠;VITAL系统可采用全新的同源荧光技术，荧光化学物质不仅能检出CO2的释放，还能感应PH和氧化还原电势的变化;ESP血培养系统检测较少的葡萄球菌和革兰阴性肠杆菌。[2]
血液细菌自动培养系统相对手工血培养首先缩短了阳性检出时间，为治疗患者赢得了时间，其次检出的细菌种类增多，操作简便，提高了培养的阳性率，但是成本也相对提高。
3 血液细菌培养注意事项。
3.1 2007年，CLSI在血培养指南中指出，在进行血液细菌培养时应在不同部位采血2至3套[3]。改变了早期采用的单侧单瓶培养。研究结果表明，采用单侧单瓶、单侧双瓶、双侧双瓶进行血液细菌培养可显著降低样本的污染率，提高对凝固酶阴性葡萄球菌或绿色链球菌的辨识度[4]。
3.2 采血的时机尽可能在寒颤和发热初起时（心内膜炎持续性菌血病例外）;尽可能在抗菌药物使用前（如果患者已經使用抗菌药物治疗，应该在下一次用药之前采集血培养）。
3.3 血液细菌培养持续阴性的可疑菌血症应考虑转移血培养方法，选择不同的培养基使其提高对分枝杆菌、真菌或苛氧菌的检出率。选用不同的培养基为患者进行血液细菌培养的阳性率有所不同[5]。
3.4 我们还应注意血液细菌培养的采血量。对于成人，每瓶血液细菌培养需要5-10ml血液，当采血量不足需氧和厌氧两个血培养瓶时，首先满足需氧瓶;对于儿童，每瓶需要2-4ml血液（对于婴幼儿，采血量不应超过患儿总血量的1%。由于新生儿厌氧菌感染极少，建议只采用需氧瓶）检测中获得的血量与血液细菌培养结果的阳性率之间存在着直接的关系，当血量在2-30ml时致病菌检测的阳性率与血量呈正相关。
4 小结
血液细菌培养是帮助临床正确用药降低死亡率最好的工具之一。我们在工作中应该加强与临床医生的沟通联系，努力提高血液细菌培养检测结果的准确性，增加少见菌的检出率。同时，我们还要加快对血液细菌培养的相关仪器和技术的研究，通过利用现代高科技技术为临床提供更快速、更准确的血液细菌培养检验方法。
参考文献
[1] 王凤莲，陈海，李欢等 . 全自动血培养系统与双相血培养系统应用对比 . 中华医院感染学杂志 [J].2013，23（14） ：3555-3557.
[2] 丛玉隆、尹一兵、陈瑜 . 检验医学：846-847
[3] CLSI. Principles and procedures for blood cultures; Approved guideline. CLSI document 47-A [S]. Wayne， PA： Clinical and laboratory Standards Institute. 2007.
[4] 赵旺胜，王珏，文怡等 . 双侧双侧双瓶血培养在临床应用的初步研究 [J]. 临床检验杂志 ，2012，30（1）：10-12.
[5] 王恩顺，李玉香 . 血液的细菌培养 .2006，10（8）：936.
【关键词】 血培养 培养方法 注意事项
血液细菌培养结果是血源性感染诊断和影响治疗决策的重要证据之一。随着医疗技术的飞速发展，血液细菌培养技术也得到快速的发展，现对近年来血液细菌培养技术的发展进行分析。
1 血液中病原菌群现状
当微生物侵入血液迅速繁殖超出机体免疫系统清除这些微生物的能力时形成菌血症或真菌血症。资料显示，菌血症发病率持续增加[1]。目前培养分离出的病原菌革兰阳性菌多为金葡和凝固酶阴性葡萄球菌，革兰阴性杆菌多为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，真菌检出率有上升的势头。
2 血培养的方法
2.1 手工的血液细菌培养方法
2.1.1 传统的血液细菌培养方法常使用自制培养基，进行需氧培养，培养至7日无菌生长还需无菌操作进行盲转至血琼脂和巧克力琼脂平板，若仍无菌生长方可出报告;若分离出可疑致病菌后还需转种至血平板和巧克力琼脂平板，待其生长后才能做抗菌素的敏感实验。此法对细菌检出率低，且不能做厌氧菌培养，培养时间长，容易污染。唯一优势就是成本较低。
2.1.2 手工商业化血液细菌培养方法
手工商业化血液细菌培养基有液体血培养瓶和固液双相血培养瓶，最常采用的是固液双相血培养瓶。采用带有琼脂斜面的固液双相血培养瓶形式，减少了转种环节，不仅可以缩短检出时间，简化操作和减少污染，而且苛氧菌在固体培养基上的生长显著优于液体培养基。即双相培养系统对临床各种需氧菌和兼性厌氧菌有一定的检出能力，但不能检出厌氧菌。双相血液细菌培养需要每天取出培养瓶，人工肉眼仔细观察瓶中液体及琼脂斜面上有无细菌生长，该方法很容易产生对一些菌量少、沉淀生长液体清亮的阳性培养菌的漏判，影响阳性标本检出率和检出时间。
2.2 自动化血液细菌培养系统
传统的血液细菌培养方法存在阳性检出率较低、易污染，检测时间较长等缺点，已远远不能满足临床需求，这就使得快速、准确检测血液中病原微生物的方法应运而生——自动血液细菌培养系统。
2.2.1 自动化血培养仪的工作原理
细菌在生长繁殖和代谢的过程中产生二氧化碳，二氧化碳可引起酸碱度、氧化还原电势等的变化。通过检测细菌生长代谢产生的二氧化碳，如采用放射性14C标记技术，特殊的二氧化碳感受器或均质荧光技术等检测培养基中酸碱度、氧化还原电势等的变化，判断待检标本中细菌的存在。
2.2.2 常用的自动化血培养系统及其性能。
BACTEC460系统是最早的半自动化血培养仪，它比传统培养技术更快捷、灵敏，特别用于结核菌的培养和药敏;BACTEC9000系列全自动血培养的优点为速度快，准确性高，5d培养阳性率为100%（除外分枝杆菌和真菌），假阳性率低、系统安全可靠;VITAL系统可采用全新的同源荧光技术，荧光化学物质不仅能检出CO2的释放，还能感应PH和氧化还原电势的变化;ESP血培养系统检测较少的葡萄球菌和革兰阴性肠杆菌。[2]
血液细菌自动培养系统相对手工血培养首先缩短了阳性检出时间，为治疗患者赢得了时间，其次检出的细菌种类增多，操作简便，提高了培养的阳性率，但是成本也相对提高。
3 血液细菌培养注意事项。
3.1 2007年，CLSI在血培养指南中指出，在进行血液细菌培养时应在不同部位采血2至3套[3]。改变了早期采用的单侧单瓶培养。研究结果表明，采用单侧单瓶、单侧双瓶、双侧双瓶进行血液细菌培养可显著降低样本的污染率，提高对凝固酶阴性葡萄球菌或绿色链球菌的辨识度[4]。
3.2 采血的时机尽可能在寒颤和发热初起时（心内膜炎持续性菌血病例外）;尽可能在抗菌药物使用前（如果患者已經使用抗菌药物治疗，应该在下一次用药之前采集血培养）。
3.3 血液细菌培养持续阴性的可疑菌血症应考虑转移血培养方法，选择不同的培养基使其提高对分枝杆菌、真菌或苛氧菌的检出率。选用不同的培养基为患者进行血液细菌培养的阳性率有所不同[5]。
3.4 我们还应注意血液细菌培养的采血量。对于成人，每瓶血液细菌培养需要5-10ml血液，当采血量不足需氧和厌氧两个血培养瓶时，首先满足需氧瓶;对于儿童，每瓶需要2-4ml血液（对于婴幼儿，采血量不应超过患儿总血量的1%。由于新生儿厌氧菌感染极少，建议只采用需氧瓶）检测中获得的血量与血液细菌培养结果的阳性率之间存在着直接的关系，当血量在2-30ml时致病菌检测的阳性率与血量呈正相关。
4 小结
血液细菌培养是帮助临床正确用药降低死亡率最好的工具之一。我们在工作中应该加强与临床医生的沟通联系，努力提高血液细菌培养检测结果的准确性，增加少见菌的检出率。同时，我们还要加快对血液细菌培养的相关仪器和技术的研究，通过利用现代高科技技术为临床提供更快速、更准确的血液细菌培养检验方法。
参考文献
[1] 王凤莲，陈海，李欢等 . 全自动血培养系统与双相血培养系统应用对比 . 中华医院感染学杂志 [J].2013，23（14） ：3555-3557.
[2] 丛玉隆、尹一兵、陈瑜 . 检验医学：846-847
[3] CLSI. Principles and procedures for blood cultures; Approved guideline. CLSI document 47-A [S]. Wayne， PA： Clinical and laboratory Standards Institute. 2007.
[4] 赵旺胜，王珏，文怡等 . 双侧双侧双瓶血培养在临床应用的初步研究 [J]. 临床检验杂志 ，2012，30（1）：10-12.
[5] 王恩顺，李玉香 . 血液的细菌培养 .2006，10（8）：936.