大肠杆菌菌毛抗原K99与耐热肠毒素ST Ⅰ融合基因的克隆与核苷酸序列测定

• 作 者: 李书光 沈志强 单虎 管宇 肖跃强 王金良 南松剑 刘吉山
• 机 构: 莱阳农学院动物科技学院,山东省滨州畜牧兽医研究院
• 出 处: 中国兽药杂志
• 发表日期: 2007年4期
• 关键词: K99菌毛抗原基因 STⅠ基因合成片断 融合基因 克隆与测序 K99 antigen gene synthetic nucleic acid fragment

采用PCR技术，从大肠杆菌K99中扩增出0．54kb的K99菌毛抗原基因，然后将其克隆到pUCm—T载体上，用Bgl Ⅱ鉴定K99插入的方向并测序。选择目的基因片段插入方向正确的重组质粒经BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切后，通过T4连接酶与同样经BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切合成的耐热肠毒素ST Ⅰ核苷酸序列连接，通过PCR方法鉴定分析和核苷酸序列测序分析，证明插入的K99-ST Ⅰ融合基因片段具有正确的核苷酸序列。