【摘 要】
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目的 探讨野生型和截短型小鼠睫状神经营养因子(CNTF)基因的真核表达及其在视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞中目的蛋白的表达及意义. 方法通过逆转录聚和酶链反应(RT-PCR)扩
【机 构】
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天津医科大学,天津市眼科医院,津市内分泌研究所
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目的 探讨野生型和截短型小鼠睫状神经营养因子(CNTF)基因的真核表达及其在视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞中目的蛋白的表达及意义. 方法通过逆转录聚和酶链反应(RT-PCR)扩增小鼠CNTF野生型全长编码序列,体外定点突变获取截短型CNTF的互补DNA(cDNA)编码序列,构建上述两序列分别克隆至pTracer-CMV真核表达载体,转染ARPE-19细胞,免疫印迹检测两种CNTF的表达.通过噻唑蓝(MTT)和流式细胞仪定量凋亡检测观察两种CNTF基因在去血清培养的ARPE-19细胞中表达后产生的生物学效应. 结果 PCR成功扩增了野生型和截短型CNTF基因,DNA序列分析证实两种真核表达载体中的CNTF序列与Gene Bank中目的序列一致.两种重组真核表达质粒转染ARPE-19细胞后,免疫印迹检测结果证实CNTF在ARPE-19细胞培养上清中有表达.MTT检测结果显示CNTF不能促进ARPE-19细胞的增殖,流式细胞仪凋亡分析提示CNTF在一定程度上可以抑制去血清培养引起的ARPE-19细胞凋亡.结论 野生型和截短型CNTF基因在ARPE-19细胞系的真核表达为视网膜色素变性基因治疗研究奠定了基础.(中华眼科杂志,2006,42:1017-1022)
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