【摘 要】
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该研究以青杆(Picea wilsonii)为实验材料,通过PCR从青杆的cDNA文库中克隆得到一个NAC转录因子,命名为PwNAC30.生物信息学分析显示,PwNAC30开放阅读框1 179 bp,共编码392个氨
【机 构】
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北京林业大学森林培育与保护教育部重点实验室,北京,100083
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该研究以青杆(Picea wilsonii)为实验材料,通过PCR从青杆的cDNA文库中克隆得到一个NAC转录因子,命名为PwNAC30.生物信息学分析显示,PwNAC30开放阅读框1 179 bp,共编码392个氨基酸,在其N端存在保守的NAM(no apical meristem)结构域,可分为A～E等5个亚结构域.多序列对比和系统进化树分析显示,PwNAC30蛋白与同为云杉属的北美云杉(Picea sitchensis)聚为一类.启动子克隆分析显示,PwNAC30基因启动子上存在脱落酸(ABA)、赤霉素(GA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、TC-rich repeats等激素和逆境响应元件,在GA、ABA、MeJA、低温、干旱、盐的处理下,其启动子活性均明显增强.荧光定量PCR分析表明,PwNAC30在球果中的表达量最高,而在花粉和种子中的表达量最低.PwNAC30对于盐、干旱、低温、ABA、MeJA、GA处理均有响应,尤其对盐、干旱、MeJA的响应最为显著.亚细胞定位结果显示,PwNAC30蛋白定位于细胞核与细胞质,主要定位于细胞核中.酵母单杂及双杂结果表明,PwNAC30蛋白的全长和N端没有转录激活活性,而C端有转录激活活性,且PwNAC30自身能形成同源二聚体.研究表明,青杆PwNAC30基因可以作为一个转录因子发挥作用,其转录激活活性在C端,且自身能够形成同源二聚体结构;PwNAC30基因广泛参与了ABA、GA、MeJA等激素的信号通路,并对盐、干旱、低温处理有响应.
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