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摘要：目的：探讨蛛网膜下腔出血患者脑脊液Rho激酶、氧合血红蛋白表达及意义。方法：采用回顾性分析法，选取2014年4月至2015年2月期间我院收治的60例蛛网膜下腔出血患者的临床资料，患者入院后采集脑脊液标本，然后利用RT-PCR方法检测患者Rho激酶、mRNA的表达，再采用比色法测定患者脑脊液中氧合血红蛋白浓度，利用TCD检测颅内主要动脉血流速度。结果：患者出血后第三天脑脊液中Rho激酶表达及氧合血红蛋白浓度明显增高，出血后第7天达到最高峰，出血7天以后两项指标逐渐下降。结论：蛛网膜下腔出血患者脑脊液中Rho激酶表达与氧合血红蛋白含量与出血后脑血管痉挛程度呈正相关关系。
关键词：蛛网膜；下腔出血；脑脊液；Rho激酶；氧合血红蛋白；表达；意义
蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）往往因为出血灶本身和迟发型脑血管痉挛（Late onset of cerebral vasospasm，DCVS）等一些列继发性改变而引起的脑水肿和迟发型脑缺血损伤，导致患者残疾和死亡[2]。所以，提高SAH的治愈率和减少并发症是临床工作的重点[3]。据有研究显示，氧合血红蛋白（OxyHb）是导致血管痉挛的重要因素，可以通过Rho激酶和蛋白激酶C信号系统发挥血管收缩作用，提高人体内的Rho激酶活性，与CVS有着重要的关系。我院研究蛛网膜下腔出血患者脑脊液Rho激酶、氧合血红蛋白表达及意义，特选取60例患者进行深入的研究，并作如下报告。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机选取2014年4月至2015年2月期间我院收治的60例蛛网膜下腔出血患者的临床资料进行回顾性分析，所有患者均经CT检查确诊为蛛网膜下腔出血。60例患者中男35例，女25例，年龄30-75岁，平均年龄（（41.23±8.36）岁；所有患者均排除糖尿病、高血压、脑血管等疾病，所有患者在临床资料等方面均没有明显的差异，具有可比性。
1.2 脑血管痉挛测定
患者脑血管痉挛的测定采用TCD探头置于枕窗或者双侧颞窗，分别探测患者双侧大脑中动脉，探测过程中利用计算机储存检测数据，然后脱机分析并记录患者的血流速度。
1.3 方法
患者入院后立刻进行常规治疗，治疗内容包括：提高血压、血液稀释、给予患者钙离子拮抗剂等。在患者发病后的第1、3、7、14d，利用腰穿的方式留取患者脑脊液，并在低温下保存脑脊液，集齐所需标本后进行集中监测。
1.3.1 Rho激酶mRNA的表达的检测
利用RT-PCR方法检测检测患者的 Rho激酶mRNA的表达，首先取患者离心后的去上清液的脑脊液，然后用Trizo提取患者总RNA，纯度测量采用紫外分光光度计测量。每一个PCR反应需要重复3次。然后对其进行电泳分离，观察扩增产物亮度和大小，并进行摄像。
1.3.2 OxyHb测定
利用比色法测量患者脑脊液中OxyHb浓度，首先取患者2ml脑脊液标本，离心5min，弃取上清测定沉淀物，然后利用分光光度计测量A560、CSFA540以及A576的值，然后计算OxyHb浓度值。
1.4 统计学处理
本次调查所有数据均采用软件SPSS20.0统计，计量资料采用（X±s）表示，用t检验，P<0.05，代表数据之间具有统计意义，可以进行比较分析。
2 结果
2.1 SAH患者脑脊液OxyHb浓度和颅内主要动脉血流速度变分析
经过一系列的检测，发现患者出血后第三天脑脊液中Rho激酶表达及氧合血红蛋白浓度明显增高，出血后第七天达到最高峰，出血14天以后两项明显下降。患者发病后3天OxyHb浓度开始上升，第7天达到高峰，患者第3天的OxyHb浓度与第1、3、14天相比具有明显的差异（p<0.05），具有统计学意义；发病后第14天OxyHb浓度明显低于发病后第7天（p<0.05），具有统计学意义，见表1。
表1：SAH后各时间段脑脊液OxyHb浓度和颅内主要动脉血流速度变化（X±s）
2.2 者脑脊液RHO激酶mRNA的表达分析
患者发病后第三天脑脊液中Rho激酶mRNA的明显增高，出血后第七天达到最高峰，出血14天以后两项明显下降。
3 讨论
CVS主要是指在蛛网膜下腔出血后人体大脑底部发生的迟发性缩窄，它是蛛网膜下腔出血的严重并发症，能够引发患者严重的血管神经损伤，致残率和致死率比较高，具有较大的潜在危险性。
研究CVS的病理学特征不难发现，血管平滑肌异常收缩在病例中起着重要的作用，血管平滑肌主要调节机制是MLC磷酸化。SAH发病后，人体血液中至痉挛物质能够激活细胞表面的受体，从而影响使RhoA转位到细胞膜，并与GTP进行结合活化，从而激活人体Rho激酶，进而对磷酸化MLC进行直接作用，在通过磷酸化17 ku的平滑肌特异性肌球蛋白磷酸酶抑制物抑制MLCP，使其失去活性，，增加平滑肌对恒定钙离子的敏感性，导致平滑肌细胞收缩增强。本次研究中SAH患者发病后第3天Rho激酶mRNA的表达开始增高，第7天达到峰值，第14太难明显降低，各个时间段内患者的颅内主动脉血流速度变化与Rho激酶mRNA的表达变化相同。
OxyHb是目前一种标记重要的血管致痉物质，同时也是引起脑细胞血管痉挛的重要因素[1]。Fyiedman等研究发现，SAH出血量与血管痉挛程度有着密切的关系。OxyHb能够明显提高和蛋白激酶C转位，它是触发血管痉挛的重要原因。本次研究中，患者发病后第三天明显增高，出血后第七天达到最高峰，出血14天以后两项明显下降，各个时间段内患者的颅内主动脉血流速度变化与xyHb浓度变化类似。
综上所述，蛛网膜下腔出血患者脑脊液中Rho激酶表达、氧合血红蛋白含量与出血后脑血管痉挛程度呈正相关关系。
参考文献：
[1] 吴德模，管义祥，居兴云等.Rho激酶、氧合血红蛋白与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的关系[J].临床神经外科杂志，2012，09（5）：298-299.
[2] 陈茂华，孙军，陆川等.蛛网膜下腔出血后RHO激酶影响脑血管痉挛的初步研究[J].中国医师杂志，2008，10（12）：1605-1607 .
[3] 刘明亮.Rho激酶抑制剂（Y-27632）对兔蛛网膜下腔出血的疗效研究[D].河南大学，2014.
关键词：蛛网膜；下腔出血；脑脊液；Rho激酶；氧合血红蛋白；表达；意义
蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）往往因为出血灶本身和迟发型脑血管痉挛（Late onset of cerebral vasospasm，DCVS）等一些列继发性改变而引起的脑水肿和迟发型脑缺血损伤，导致患者残疾和死亡[2]。所以，提高SAH的治愈率和减少并发症是临床工作的重点[3]。据有研究显示，氧合血红蛋白（OxyHb）是导致血管痉挛的重要因素，可以通过Rho激酶和蛋白激酶C信号系统发挥血管收缩作用，提高人体内的Rho激酶活性，与CVS有着重要的关系。我院研究蛛网膜下腔出血患者脑脊液Rho激酶、氧合血红蛋白表达及意义，特选取60例患者进行深入的研究，并作如下报告。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机选取2014年4月至2015年2月期间我院收治的60例蛛网膜下腔出血患者的临床资料进行回顾性分析，所有患者均经CT检查确诊为蛛网膜下腔出血。60例患者中男35例，女25例，年龄30-75岁，平均年龄（（41.23±8.36）岁；所有患者均排除糖尿病、高血压、脑血管等疾病，所有患者在临床资料等方面均没有明显的差异，具有可比性。
1.2 脑血管痉挛测定
患者脑血管痉挛的测定采用TCD探头置于枕窗或者双侧颞窗，分别探测患者双侧大脑中动脉，探测过程中利用计算机储存检测数据，然后脱机分析并记录患者的血流速度。
1.3 方法
患者入院后立刻进行常规治疗，治疗内容包括：提高血压、血液稀释、给予患者钙离子拮抗剂等。在患者发病后的第1、3、7、14d，利用腰穿的方式留取患者脑脊液，并在低温下保存脑脊液，集齐所需标本后进行集中监测。
1.3.1 Rho激酶mRNA的表达的检测
利用RT-PCR方法检测检测患者的 Rho激酶mRNA的表达，首先取患者离心后的去上清液的脑脊液，然后用Trizo提取患者总RNA，纯度测量采用紫外分光光度计测量。每一个PCR反应需要重复3次。然后对其进行电泳分离，观察扩增产物亮度和大小，并进行摄像。
1.3.2 OxyHb测定
利用比色法测量患者脑脊液中OxyHb浓度，首先取患者2ml脑脊液标本，离心5min，弃取上清测定沉淀物，然后利用分光光度计测量A560、CSFA540以及A576的值，然后计算OxyHb浓度值。
1.4 统计学处理
本次调查所有数据均采用软件SPSS20.0统计，计量资料采用（X±s）表示，用t检验，P<0.05，代表数据之间具有统计意义，可以进行比较分析。
2 结果
2.1 SAH患者脑脊液OxyHb浓度和颅内主要动脉血流速度变分析
经过一系列的检测，发现患者出血后第三天脑脊液中Rho激酶表达及氧合血红蛋白浓度明显增高，出血后第七天达到最高峰，出血14天以后两项明显下降。患者发病后3天OxyHb浓度开始上升，第7天达到高峰，患者第3天的OxyHb浓度与第1、3、14天相比具有明显的差异（p<0.05），具有统计学意义；发病后第14天OxyHb浓度明显低于发病后第7天（p<0.05），具有统计学意义，见表1。
表1：SAH后各时间段脑脊液OxyHb浓度和颅内主要动脉血流速度变化（X±s）
2.2 者脑脊液RHO激酶mRNA的表达分析
患者发病后第三天脑脊液中Rho激酶mRNA的明显增高，出血后第七天达到最高峰，出血14天以后两项明显下降。
3 讨论
CVS主要是指在蛛网膜下腔出血后人体大脑底部发生的迟发性缩窄，它是蛛网膜下腔出血的严重并发症，能够引发患者严重的血管神经损伤，致残率和致死率比较高，具有较大的潜在危险性。
研究CVS的病理学特征不难发现，血管平滑肌异常收缩在病例中起着重要的作用，血管平滑肌主要调节机制是MLC磷酸化。SAH发病后，人体血液中至痉挛物质能够激活细胞表面的受体，从而影响使RhoA转位到细胞膜，并与GTP进行结合活化，从而激活人体Rho激酶，进而对磷酸化MLC进行直接作用，在通过磷酸化17 ku的平滑肌特异性肌球蛋白磷酸酶抑制物抑制MLCP，使其失去活性，，增加平滑肌对恒定钙离子的敏感性，导致平滑肌细胞收缩增强。本次研究中SAH患者发病后第3天Rho激酶mRNA的表达开始增高，第7天达到峰值，第14太难明显降低，各个时间段内患者的颅内主动脉血流速度变化与Rho激酶mRNA的表达变化相同。
OxyHb是目前一种标记重要的血管致痉物质，同时也是引起脑细胞血管痉挛的重要因素[1]。Fyiedman等研究发现，SAH出血量与血管痉挛程度有着密切的关系。OxyHb能够明显提高和蛋白激酶C转位，它是触发血管痉挛的重要原因。本次研究中，患者发病后第三天明显增高，出血后第七天达到最高峰，出血14天以后两项明显下降，各个时间段内患者的颅内主动脉血流速度变化与xyHb浓度变化类似。
综上所述，蛛网膜下腔出血患者脑脊液中Rho激酶表达、氧合血红蛋白含量与出血后脑血管痉挛程度呈正相关关系。
参考文献：
[1] 吴德模，管义祥，居兴云等.Rho激酶、氧合血红蛋白与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的关系[J].临床神经外科杂志，2012，09（5）：298-299.
[2] 陈茂华，孙军，陆川等.蛛网膜下腔出血后RHO激酶影响脑血管痉挛的初步研究[J].中国医师杂志，2008，10（12）：1605-1607 .
[3] 刘明亮.Rho激酶抑制剂（Y-27632）对兔蛛网膜下腔出血的疗效研究[D].河南大学，2014.