【摘 要】
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目的 应用蛋白质组学方法分析研究大鼠创伤性脑损伤后海马组织差异表达蛋白质,为筛选脑损伤早期诊断的生物学标志物提供理论依据.方法 采用双向凝胶电泳分离总蛋白,硝酸银染
【机 构】
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中国人民武装警察部队医学院病理学教研室,天津,300162中国人民武装警察部队医学院科研部,天津,300162;中国人民武装警察部队医学院药物化学教研室,天津,300162;
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目的 应用蛋白质组学方法分析研究大鼠创伤性脑损伤后海马组织差异表达蛋白质,为筛选脑损伤早期诊断的生物学标志物提供理论依据.方法 采用双向凝胶电泳分离总蛋白,硝酸银染色,PDQuest 7.0图像分析软件分析获得的差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对检测到的差异蛋白质点进行鉴定,获得肽质量指纹图谱,查阅蛋白质数据库得到所需蛋白质相关信息,分析大鼠创伤性脑损伤后4 h、8 h、12 h、24 h和48 h海马组织中差异表达蛋白质,每组样品电泳重复3次,每帧图谱检测到1800余个蛋白质点;选择2个背景清晰、重复性及分辨力良好、在各组表达差异明显并呈现时序性变化的蛋白质点进行质谱分析.结果 经双向凝胶电泳分离共获得18帧图,每组3帧,其中对照组及损伤后12 h组蛋白质图谱显示分离效果良好,蛋白质点清晰,点染色程度较深,数目较多.横纹和纵纹较少,图谱平均匹配率>80%.采用PDQuest 7.0图像分析软件对蛋白质图谱进行定量分析证实,相对分子质量为58.00×103的差异蛋白质为葡萄糖调节蛋白(葡萄糖调节蛋白58),在损伤后4 h、8 h和12 h表达水平上调;相对分子质量为28.40×103的差异蛋白质为蛋白酶体α亚单位3型.在损伤后4 h、8 h、12 h、24 h和48 h表达水平均上调.结论 葡萄糖调节蛋白58和蛋白酶体α亚单位3型可能与创伤性脑损伤的发生、发展密切相关,此为探讨脑损伤的发病机制提供了重要线索.
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