结核分枝杆菌毒素蛋白 higB 的原核表达及分析

• 作 者: 刘丹 伊正君 付玉荣 李书轻 杨珊珊
• 机 构: 潍坊医学院临床检验诊断学教研室,潍坊医学院附属医院检验科,潍坊医学院病原生物学教研室,菏泽市第三人民医院检验科,中国人民解放军第401医院检验科
• 出 处: 潍坊医学院学报
• 发表日期: 2015年4期
• 关键词: 结核分枝杆菌 毒素抗毒素系统 蛋白表达 higB Mycobaeterium tuberculosis toxin-antitoxin system higB

目的：克隆编码结核分枝杆菌毒素基因higB并在大肠杆菌中表达。方法利用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增higB基因；构建重组表达质粒pET-32a（＋）-higB；筛选出阳性重组质粒后转化大肠杆菌，诱导目的蛋白表达；利用SDS-PAGE与Western-blot鉴定目的蛋白的表达。结果成功扩增出了higB基因，克隆于载体pET-32 a（＋）质粒中，PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆，测序证实正确；转化大肠杆菌BL21后higB蛋白没有发生表达。结论已成功构建结核分枝杆菌毒素基因higB的原核表达