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摘 要：针对目前蔬菜水果中多残留农药分析的前处理存在操作繁琐、自动化程度低、提取净化效率低、溶剂使用量大、溶剂挥发物毒害检测人员等缺点，该文建立了全自动固相萃取-浓缩-定容蔬菜水果多残留农药检测前处理方法，不仅简化了繁琐的样品前处理流程、降低了工作量，而且可以保护检验员免受有有机溶剂毒害，能够满足蔬菜水果中多残留农药的检测需求。
关键词：固相萃取；自动浓缩定容；蔬菜水果；农药残留；检测
中图分类号 O657.71 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）01-75-02
农业生产者为获得更多的产品，加大了各种农药的使用量，促使农药残留问题日趋严峻，因此，农产品质量安全的监管和检测工作显得尤为重要。为促进农产品质量安全的检验检测工作，我国相继推出了一系列国家标准和行业标准分析方法，使蔬菜水果多残留农药检测技术得到了快速推广。由于蔬菜水果样品基质复杂，含有大量的色素等干扰物质，严重干扰了提取液中农药残留的检测，因而农药残留的前处理技术尤为重要，但是目前蔬菜水果中多残留农药分析的前处理存在操作繁琐、自动化程度低、提取净化效率低、溶剂使用量大、溶剂挥发物毒害检测人员等缺点。为此，本研究根据相关国家标准和行业标准分析方法，采用全自动固相萃取-定量浓缩仪，用乙腈+甲苯提取，石墨碳黑/氨基（GCB/NH2）固相萃取柱富集净化，建立了全自动固相萃取-浓缩-定容蔬菜水果多残留农药检测前处理方法。
1 实验部分
1.1 仪器与设备 LabTech PrepElite-SV全自动固相萃取-定量浓缩前处理平台（美国莱伯泰科有限公司），GC2010-PLUS气相色谱仪（日本岛津公司），配备FPD检测器，色谱柱：Rtx-1701（30m×0.25mm×0.25μm毛细柱），高速离心机HC-3018（安徽中科中佳科学仪器有限公司）。
1.2 试剂与材料 丙酮、乙腈和甲苯均为色谱纯，无水硫酸钠为分析纯650℃灼烧4h，氯化钠为优级纯140℃烘烤4h，水为去离子水。提取溶剂为乙腈+甲苯（3+1）。CNWBOND GCB/NH2石墨化炭黑/氨基复合SPE柱（500mg/500mg/6mL）。13种农药标准品：敌敌畏（Dichlorvos）、甲胺磷（Methamidophos）、乙酰甲胺磷（Acephate）、甲拌磷（Phorate）、氧乐果（Omethoate）、久效磷（Monocrotophos）、磷铵（Phoshamidon）、对硫磷（Parathion）、毒死蜱（Chlorpyrifos）、杀螟硫磷（Fenitrothion）、甲基对硫磷（Parathion-methyl）、水胺硫磷（Isocarbophos）、三唑磷（Triazophos），购于上海农药研究所有限公司，浓度均为100μg/mL。
1.3 工作液的配制 标准工作溶液的配制：各取0.200mL上述农药标准液于10mL容量瓶中，用丙酮稀释定容，配制成各农药组分质量浓度均为2μg/mL的混合工作液。由此工作液通过稀释得到0.05、0.10、0.20、0.40、0.80μg/mL共5个浓度的混合标准工作液，贮存在4℃冰箱中备用。
1.4 样品前处理
1.4.1 样品的提取 准确称取10g（精确至0.01g）均匀试样，置于50mL离心管中，加入20mL提取溶剂乙腈+甲苯（3+1），用均质器在15 000r/min匀浆提取1min，加入3g氯化钠，在匀浆提取1min，将离心管放入离心机，在3 000r/min离心5min，取上清液10mL装入LabTech PrepElite-SV全自动固相萃取—定量浓缩前处理平台的进样瓶中待净化。
1.4.2 样品的净化和定容 首先向CNWBOND GCB/NH2石墨化炭黑/氨基复合SPE柱（500mg/500mg/6mL）中填充高约2cm的无水硫酸钠，放入LabTech PrepElite-SV全自动固相萃取-定量浓缩前处理平台的萃取柱架中。设置固相萃取-定容浓缩方法如下：氮气压力调至0.05MP，真空泵真空度为-0.03MP。SPE固相萃取设置内容：方法类型为保留目标物；润洗设为收集次数为0次、溶剂类型为乙腈+甲苯（3+1）、体积为7.0mL、流速为1.0mL/min、干燥时间为0s；上样设为收集次数为1次、溶剂类型为待净化样品、体积为4.0mL、流速为1.5mL/min、干燥时间为0s；洗脱设为收集次数为1次、溶剂类型为乙腈+甲苯（3+1）、体积为24.0mL、流速为1.5mL/min、干燥时间为30s。Concentration浓缩定量设置内容：浓缩方式为定量浓缩、定容体积为2.0mL、加热温度为50℃；清洗溶剂（指实验结束清洗浓缩杯）为溶剂1（丙酮）、清洗次数为2次，体积为5mL、清洗时间为15s，吹干为1min。编辑批处理表或单针运行，填入相应参数（定容用S1丙酮），样品经上述步骤净化浓缩定容后，最终收集到用丙酮定容为2.0mL的待测样品。
1.5 色谱条件 色谱柱：Rtx-1701（30m×0.25mm×0.25um毛细柱）载气：高纯氮气（99.999%），载气流量：1.01mL/min，氢气62.5mL/min，空气90mL/min，吹扫3.0mL/min，FPD检测器，检测器温度280℃，进样口温度250℃，进样方式：不分流自动进样，控制模式：线速度28cm/s，升温程序：90℃保持1.0min、以18℃/min升到200℃保持0.0min、以1℃/min升到212℃保持0.0min、以15℃/min升到220℃保持2.0min、以30℃/min升到270℃保持5.0min，进样量1.0μL，定量方法：峰面积外标法定量。
2 结果与分析
2.1 目标物质的分离效果 取0.2μg/mL标准溶液，按照上述色谱条件测定，13种有机磷农药可得到良好的分离效果，出峰顺序依次为：敌敌畏（6.613min）、甲胺磷（7.364min）、乙酰甲胺磷（9.642min）、甲拌磷（10834min）、氧乐果（12.013min）、久效磷（14.156min）、磷铵1（14.815min）、毒死蜱（16.770min）、甲基对硫磷（17.219min）、磷铵2（17.367min）、杀螟硫磷（18.497min）、对硫磷（19.675min）、水胺硫磷（20.718min）、三唑磷（25.881min），得到色谱图1。 <＼＼Pc10＼工作盘 （E）＼姜秀红＼杂志＼安徽农学通报杂志＼2016-1农学通报内文＼8985-1.tif>
图1 0.2μg/mL13种标准物质色谱
注：1敌敌畏（6.613min），2甲胺磷（7.364min），3乙酰甲胺磷（9.642min），4甲拌磷（10834min），5氧乐果（12.013min），6久效磷（14.156min），7磷铵1（14.815min），8毒死蜱（16.770min），9甲基对硫磷（17.219min），10磷铵2（17.367min），11杀螟硫磷（18.497min），12对硫磷（19.675min），13水胺硫磷（20.718min），14三唑磷（25.881min）。
2.2 线性范围及相关系数 线性范围为：0.05～0.80μg/mL，各浓度分别为：0.05、0.10、0.20、0.40、0.80μg/mL，按上述色谱条件进样分析，通过计算得到相关系数、线性方程、检出限，见表1。
2.3 方法的回收率与精密度 在已知不含农药残留的西葫芦样品中，添加13种有机磷农药，计算得到各农药含量为0.3mg/kg3个重复样品，使用上述“1.4样品前处理”方法进行样品提取后分析，3个添加相同浓度的样品回收率和精密度见表2。由表2可知，13种有机磷农药的平均回收率在76.72%～100.93%，相对标准偏差RSD在1.41%～7.22%，检测中未出现色谱峰干扰情况，回收率高，重复性良好。
3 结论
本文研究并建立一种全自动固相萃取-浓缩-定容蔬菜水果多残留农药检测前处理方法，方法符合农药残留的检测要求，实现了前处理过程自动化。该方法实用性强、自动化程度高、净化效果好、干扰少、重现性好、回收率高，可以有效保护检验员免受有有机溶剂毒害，能够满足蔬菜水果中多残留农药的检测需求。
参考文献
[1]GB/T 19648-2006 水果和蔬菜中500种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法[S].
[2]NY/T 761-2008 蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定[S].
[3]王江，王辛，梁晓聪，等.固相萃取-气相色谱法检测蔬菜中17种残留的有机磷农药[J].中国卫生检验杂志，2008，18（2）：255-256.
[4]汤富彬，陈宗懋，罗逢健，等.固相萃取-气相色谱法检测茶叶中的有机磷农药残留量[J].分析试验室，2007，26（2）：43-47.
[5]于鸿，陈安，李晓晶，等.固相萃取结合气相色谱法测定蔬菜中33种有机磷农药的残留量[J].中国食品卫生杂志，2011，23（4）：330-335. （责编：张宏民）
关键词：固相萃取；自动浓缩定容；蔬菜水果；农药残留；检测
中图分类号 O657.71 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）01-75-02
农业生产者为获得更多的产品，加大了各种农药的使用量，促使农药残留问题日趋严峻，因此，农产品质量安全的监管和检测工作显得尤为重要。为促进农产品质量安全的检验检测工作，我国相继推出了一系列国家标准和行业标准分析方法，使蔬菜水果多残留农药检测技术得到了快速推广。由于蔬菜水果样品基质复杂，含有大量的色素等干扰物质，严重干扰了提取液中农药残留的检测，因而农药残留的前处理技术尤为重要，但是目前蔬菜水果中多残留农药分析的前处理存在操作繁琐、自动化程度低、提取净化效率低、溶剂使用量大、溶剂挥发物毒害检测人员等缺点。为此，本研究根据相关国家标准和行业标准分析方法，采用全自动固相萃取-定量浓缩仪，用乙腈+甲苯提取，石墨碳黑/氨基（GCB/NH2）固相萃取柱富集净化，建立了全自动固相萃取-浓缩-定容蔬菜水果多残留农药检测前处理方法。
1 实验部分
1.1 仪器与设备 LabTech PrepElite-SV全自动固相萃取-定量浓缩前处理平台（美国莱伯泰科有限公司），GC2010-PLUS气相色谱仪（日本岛津公司），配备FPD检测器，色谱柱：Rtx-1701（30m×0.25mm×0.25μm毛细柱），高速离心机HC-3018（安徽中科中佳科学仪器有限公司）。
1.2 试剂与材料 丙酮、乙腈和甲苯均为色谱纯，无水硫酸钠为分析纯650℃灼烧4h，氯化钠为优级纯140℃烘烤4h，水为去离子水。提取溶剂为乙腈+甲苯（3+1）。CNWBOND GCB/NH2石墨化炭黑/氨基复合SPE柱（500mg/500mg/6mL）。13种农药标准品：敌敌畏（Dichlorvos）、甲胺磷（Methamidophos）、乙酰甲胺磷（Acephate）、甲拌磷（Phorate）、氧乐果（Omethoate）、久效磷（Monocrotophos）、磷铵（Phoshamidon）、对硫磷（Parathion）、毒死蜱（Chlorpyrifos）、杀螟硫磷（Fenitrothion）、甲基对硫磷（Parathion-methyl）、水胺硫磷（Isocarbophos）、三唑磷（Triazophos），购于上海农药研究所有限公司，浓度均为100μg/mL。
1.3 工作液的配制 标准工作溶液的配制：各取0.200mL上述农药标准液于10mL容量瓶中，用丙酮稀释定容，配制成各农药组分质量浓度均为2μg/mL的混合工作液。由此工作液通过稀释得到0.05、0.10、0.20、0.40、0.80μg/mL共5个浓度的混合标准工作液，贮存在4℃冰箱中备用。
1.4 样品前处理
1.4.1 样品的提取 准确称取10g（精确至0.01g）均匀试样，置于50mL离心管中，加入20mL提取溶剂乙腈+甲苯（3+1），用均质器在15 000r/min匀浆提取1min，加入3g氯化钠，在匀浆提取1min，将离心管放入离心机，在3 000r/min离心5min，取上清液10mL装入LabTech PrepElite-SV全自动固相萃取—定量浓缩前处理平台的进样瓶中待净化。
1.4.2 样品的净化和定容 首先向CNWBOND GCB/NH2石墨化炭黑/氨基复合SPE柱（500mg/500mg/6mL）中填充高约2cm的无水硫酸钠，放入LabTech PrepElite-SV全自动固相萃取-定量浓缩前处理平台的萃取柱架中。设置固相萃取-定容浓缩方法如下：氮气压力调至0.05MP，真空泵真空度为-0.03MP。SPE固相萃取设置内容：方法类型为保留目标物；润洗设为收集次数为0次、溶剂类型为乙腈+甲苯（3+1）、体积为7.0mL、流速为1.0mL/min、干燥时间为0s；上样设为收集次数为1次、溶剂类型为待净化样品、体积为4.0mL、流速为1.5mL/min、干燥时间为0s；洗脱设为收集次数为1次、溶剂类型为乙腈+甲苯（3+1）、体积为24.0mL、流速为1.5mL/min、干燥时间为30s。Concentration浓缩定量设置内容：浓缩方式为定量浓缩、定容体积为2.0mL、加热温度为50℃；清洗溶剂（指实验结束清洗浓缩杯）为溶剂1（丙酮）、清洗次数为2次，体积为5mL、清洗时间为15s，吹干为1min。编辑批处理表或单针运行，填入相应参数（定容用S1丙酮），样品经上述步骤净化浓缩定容后，最终收集到用丙酮定容为2.0mL的待测样品。
1.5 色谱条件 色谱柱：Rtx-1701（30m×0.25mm×0.25um毛细柱）载气：高纯氮气（99.999%），载气流量：1.01mL/min，氢气62.5mL/min，空气90mL/min，吹扫3.0mL/min，FPD检测器，检测器温度280℃，进样口温度250℃，进样方式：不分流自动进样，控制模式：线速度28cm/s，升温程序：90℃保持1.0min、以18℃/min升到200℃保持0.0min、以1℃/min升到212℃保持0.0min、以15℃/min升到220℃保持2.0min、以30℃/min升到270℃保持5.0min，进样量1.0μL，定量方法：峰面积外标法定量。
2 结果与分析
2.1 目标物质的分离效果 取0.2μg/mL标准溶液，按照上述色谱条件测定，13种有机磷农药可得到良好的分离效果，出峰顺序依次为：敌敌畏（6.613min）、甲胺磷（7.364min）、乙酰甲胺磷（9.642min）、甲拌磷（10834min）、氧乐果（12.013min）、久效磷（14.156min）、磷铵1（14.815min）、毒死蜱（16.770min）、甲基对硫磷（17.219min）、磷铵2（17.367min）、杀螟硫磷（18.497min）、对硫磷（19.675min）、水胺硫磷（20.718min）、三唑磷（25.881min），得到色谱图1。 <＼＼Pc10＼工作盘 （E）＼姜秀红＼杂志＼安徽农学通报杂志＼2016-1农学通报内文＼8985-1.tif>
图1 0.2μg/mL13种标准物质色谱
注：1敌敌畏（6.613min），2甲胺磷（7.364min），3乙酰甲胺磷（9.642min），4甲拌磷（10834min），5氧乐果（12.013min），6久效磷（14.156min），7磷铵1（14.815min），8毒死蜱（16.770min），9甲基对硫磷（17.219min），10磷铵2（17.367min），11杀螟硫磷（18.497min），12对硫磷（19.675min），13水胺硫磷（20.718min），14三唑磷（25.881min）。
2.2 线性范围及相关系数 线性范围为：0.05～0.80μg/mL，各浓度分别为：0.05、0.10、0.20、0.40、0.80μg/mL，按上述色谱条件进样分析，通过计算得到相关系数、线性方程、检出限，见表1。
2.3 方法的回收率与精密度 在已知不含农药残留的西葫芦样品中，添加13种有机磷农药，计算得到各农药含量为0.3mg/kg3个重复样品，使用上述“1.4样品前处理”方法进行样品提取后分析，3个添加相同浓度的样品回收率和精密度见表2。由表2可知，13种有机磷农药的平均回收率在76.72%～100.93%，相对标准偏差RSD在1.41%～7.22%，检测中未出现色谱峰干扰情况，回收率高，重复性良好。
3 结论
本文研究并建立一种全自动固相萃取-浓缩-定容蔬菜水果多残留农药检测前处理方法，方法符合农药残留的检测要求，实现了前处理过程自动化。该方法实用性强、自动化程度高、净化效果好、干扰少、重现性好、回收率高，可以有效保护检验员免受有有机溶剂毒害，能够满足蔬菜水果中多残留农药的检测需求。
参考文献
[1]GB/T 19648-2006 水果和蔬菜中500种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法[S].
[2]NY/T 761-2008 蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定[S].
[3]王江，王辛，梁晓聪，等.固相萃取-气相色谱法检测蔬菜中17种残留的有机磷农药[J].中国卫生检验杂志，2008，18（2）：255-256.
[4]汤富彬，陈宗懋，罗逢健，等.固相萃取-气相色谱法检测茶叶中的有机磷农药残留量[J].分析试验室，2007，26（2）：43-47.
[5]于鸿，陈安，李晓晶，等.固相萃取结合气相色谱法测定蔬菜中33种有机磷农药的残留量[J].中国食品卫生杂志，2011，23（4）：330-335. （责编：张宏民）