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目的:1.在中国北方地区汉族人群中,寻找乳腺癌和卵巢癌患者BRCA1基因(breast/ovarian cancer susceptibility genel,BRCA1)外显子2(Exon2)和外显子11(Exon11)部分序列的突变位点,旨在探讨BRCA1基因与乳腺癌和卵巢癌发病的关系;2.初步建立一种简便、经济、有效的基因突变检测方法.方法:收集2002年9月至2003年10月期间在该院肿瘤科就治的37例北方汉族乳腺癌和卵巢癌患者,同期选取健康志愿者10人.根据入选标准将入选者分为3组,即家族性及早发性乳腺癌或卵巢癌组(简称家族性、早发组),散发性乳腺癌或卵巢癌组(简称散发组)和健康对照组.根据入选标准,家族性、早发组选取16人,散发组选取21人,健康对照组选取10人.根据国外文献,选取BRCA1基因突变率最高的外显子2和11上各一对引物,由上海生工生物工程有限公司合成.利用美国Omega公司提供的DNA提取试剂盒提取入选者外周血白细胞DNA,提取液于-20℃贮存.以《分子克隆实验指南(第二版)》所提供的聚合酶链反应(PCR)条件为基础,依次改变反应温度、反应时间、循环次数和各种反应物质的浓度,摸索该实验PCR反应的优化条件.根据预试验的优化条件,扩增入选者BRCAl基因的部分序列,反应体系为50μl,循环参数如下:94℃预变性5min,加入TaqDNA酶2.5U;然后进入主循环-94℃变性35s,55℃复性45s,72℃延伸1min,循环35次;最后72℃充分延伸7min.PCR扩增产物进行单链构象多态性分析(SSCP):取PCR产物4μl与变性剂2μl混合,98℃变性6min,冰水浴骤冷10min后,将5μl样品加到6％的非变性聚丙烯凝胶中.根据预试验结果,将常规的SSCP电泳条件(100V±、15h±),改进为400V 4℃下电泳2.5h.将凝胶置于0.2％的硝酸银溶液中染色观察.电泳条带迁移率发生改变者视为异常.DNA直接测序:应用ABI377全自动测序仪,将入选者BRCA1基因外显子2和外显子11的部分序列进行DNA直接测序.测序结果与Breast Cancer Information Core(BIC)Database中的BRCA1基因序列进行核对.结论:1.乳腺癌和卵巢癌易感基因BRCA1的Exon2与中国北方地区汉族人群中的乳腺癌和卵巢癌可能存在一定的相关性,可以作为汉族人群BRCA1基因突变的筛查位点.中国北方汉族人群早发性乳腺癌的发病可能与BRCA1基因Exon2的165 bp位置碱基C插入造成的移码突变有关.2.乳腺癌和卵巢癌易感基因BRCA1的Exon11与中国北方地区汉族人群乳腺癌和卵巢癌的相关性尚待进一步的探讨.3.乳腺癌和卵巢癌易感基因BRCA1突变热点可能存在种族差异,寻找该民族的新的检测位点是今后的研究方向.4.改进的单链构象多态性分析方法,初步认定有效可行,且为一种简便、经济、快速的基因突变检测方法.