【摘 要】
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棉蚜是导致世界上农作物产量严重下降的主要害虫之一。成若蚜群集于棉叶背面和嫩尖上,以针状口器刺吸汁液,由于组织的细胞受到破坏,致使棉叶正反面生长不平衡,叶片背面卷曲,
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棉蚜是导致世界上农作物产量严重下降的主要害虫之一。成若蚜群集于棉叶背面和嫩尖上,以针状口器刺吸汁液,由于组织的细胞受到破坏,致使棉叶正反面生长不平衡,叶片背面卷曲,形成卷叶,植株矮缩,受害棉苗叶发育受阻。而喷施化学杀虫剂严重污染环境,通过表达毒蛋白来抑制或杀死害虫可能使蚜虫产生抗性。所以寻找一种新型的抗虫策略既能够有效地抵抗蚜虫,又是安全的,就成为一种迫切的要求。RNA干扰是近期发现的一种新的基因调控机制,它利用RNA序列匹配,专一地识别靶基因,在转录水平、转录后水平或翻译水平抑制靶基因表达。在农业上RNAi技术已发展成为控制虫害、提高作物品质的新方法。与传统转基因手段相比,这一技术更具选择性和安全性。本研究拟尝试通过RNAi技术,降解靶基因mRNA,抑制棉蚜内源靶基因的表达,从而达到抑制棉蚜数量的目的。根据已知生物信息学数据,通过RT-PCR技术从棉蚜中克隆了API, Catb5, Catb6, RPL18基因,AP1为网格蛋白基因,Catb5、Catb6为组织蛋白酶基因家族的两个基因,RPL18为核糖体蛋白酶基因。这四种基因都为棉蚜的持家基因,由于Catb5、Catb6组织蛋白酶基因缺少3’端,分别对Catb5、Catb6做了3’RACE,将AP1,Catb5, Catb6, RPL18基因分别通过正向和反向插入到pBi35SG12质粒中,构建了pBi35SAP1, pBi35SC5, pBi35SC6, pBi35SR18四个RNAi载体,通过农杆菌介导的方法将四个基因导入拟南芥中,经过卡那霉素和PCR技术筛选出阳性转化子,得到转基因植株。将同等数量的棉蚜接种到转基因植株和对照植株上,经过15天的观察,发现C6和R18转基因拟南芥上的蚜虫数量逐渐减少,而AP1转基因拟南芥上的蚜虫数量与野生型拟南芥上的蚜虫数量先是增加后开始减少,所以初步推断C6、R18植株起到抗虫作用。
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