【摘 要】
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目的：研究1.25二羟维生素 D3(1,25-dihydroxyvitamin D3)对人肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭、迁移的影响，并探讨1,25(OH)2D3对 HepG2细胞生物学影响的可能机制。 方法：（1）MTT法检
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目的：研究1.25二羟维生素 D3(1,25-dihydroxyvitamin D3)对人肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭、迁移的影响，并探讨1,25(OH)2D3对 HepG2细胞生物学影响的可能机制。 方法：（1）MTT法检测10-8、10-7、10-6mol/L1,25(OH)2D3以及2.5、5、10、20、40、80μmol/L LY294002对人肝癌HepG2细胞增殖的影响；10-7mol/L1,25(OH)2D3联合5μmol/L LY294002对 HepG2细胞增殖的影响， compusyn软件计算联合指数（combination index,CI）。（2）根据 MTT的结果将实验分为四组：对照组，1,25(OH)2D3组（10-7mol/L），LY294002组（5μmol/L），联合组（10-7mol/L1,25(OH)2D3+5μmol/L LY294002），对照组与各药物对肝癌HepG2细胞均处理72小时。(3)Tanswell小室检测各组对HepG2细胞侵袭的影响。（4）划痕实验法检测各组对 HepG2细胞迁移能力的抑制作用。（5）克隆形成实验检测各组对HepG2细胞克隆形成能力的影响。（6）Western blot检测各组PCNA、MMP-9、p-AKT、PTEN蛋白的表达情况。（7）采用实时荧光定量PCR方法（Real-time PCR）检测各组PTEN、 AKT基因mRNA相对表达量。 结果：（1）1,25(OH)2D3以及LY294002对人肝癌HepG2细胞增殖抑制率呈现时间-剂量依赖效应（P<0.05）；10-7mol/L1,25(OH)2D3联合5μmol/L LY294002对细胞增殖抑制显著，且二者联合高于单独药物组（ P<0.05）， compusyn软件计算CI=0.728<1，二者具有协同效应。（2）侵袭实验结果显示1,25(OH)2D3组、LY294002组以及联合组对肝癌 HepG2细胞的侵袭能力均有抑制作用，细胞侵袭数分别为45.9±6.4、49.9±6.0、27.8±4.0，与对照组(64.6±8.0)比较差异有统计学意义（P<0.05）。（3）划痕实验结果显示1,25(OH)2D3组、LY294002组以及联合组，对人肝癌HepG2迁移能力均有抑制作用，且48h迁移距离分别为35.57±4.83、37.43±3.89、25.77±3.11，与对照组（62.33±3.17）比较，差异有统计学意义；72h迁移距离分别为46.63±3.35、43.70±5.96、28.60±2.98，与对照组（89.80±4.70）比较，差异有统计学意义。（4）克隆形成实验结果显示各药物组对单个细胞增殖有抑制作用，1,25(OH)2D3组、LY294002组以及联合组集落形成数分别为95.00±13.12、82.33±7.51、48.00±4.36，与对照组（134.00±16.09）比较，差异有统计学意义。（5）Western blot分析1,25(OH)2D3组、联合组作用72h后PTEN蛋白表达量增加，与对照组比差异有统计学意义（P<0.05），LY294002作用组PTEN蛋白表达量与对照组比差异无统计学意义，1,25(OH)2D3组、LY294002组以及联合组作用72h后，PCNA、MMP-9、p-AKT蛋白的表达量均降低，与对照组比差异有统计学意义（P<0.05），且联合用药组蛋白表达量低于单独1,25(OH)2D3、LY294002用药组蛋白表达量（P<0.05）。（6）Real-time PCR结果显示1,25(OH)2D3组PTENmRNA、联合组PTENmRNA与正常对照组PTENmRNA相比较，相对表达量升高，且差异具有统计学意义（P<0.05）。LY294002组PTENmRNA与正常对照组PTENmRNA相比较，差异无统计学意义。1,25(OH)2D3组AKTmRNA、LY294002组AKTmRNA以及联合组AKTmRNA与正常对照组AKTmRNA相比，相对表达量变化差异不明显，无统计学意义（P>0.05）。 结论：1,25(OH)2D3可显著抑制人肝癌 HepG2细胞增殖、侵袭、迁移，其机制可能与1,25(OH)2D3上调PTEN表达量，抑制PI3K/AKT信号通路活性，下调PCNA、MMP-9蛋白有关，且其与LY294002联用具有协同增强的效应。
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