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本研究选择处于重要系统演化地位的地衣为材料,通过对吉林长白山、北京百花山、四川攀枝花、云南紫溪山常见地衣内生真菌的定殖率、分离率、种类组成、多样性指数、丰度、主成分分析等研究,揭示地衣内生真菌的多样性与地理位置及宿主种类的关系,取得如下结果:
以北京东灵山蜈蚣衣为材料,确定地衣内生真菌的最佳三步表面消毒方法为:75%乙醇1min,2%次氯酸钠3min,75%乙醇30s。
地衣内生真菌具有丰富的物种多样性。从9科56种地衣的4144个地衣组织块中,共分离获得3190株内生真菌,其中2618株(占总菌株数的82.1%)产生孢子。根据形态特征,鉴定为70个分类单元,包含28属49种,还有21个分类单元只能放到更高的分类地位。在这70个分类单元中,有42种丝孢菌、2种腔孢菌、26种子囊菌,其中有13个中国新记录种,即Geniculosporium serpens C.G.C。Chesters& G.N., Memnoniella subsimplex(Cooke) Deighton、 Neurospora endodonta(Malloeh& Cain) D. Gareia, Stehigel& Guarro, N. reticulata(C. Booth& Ebben) D。Garcia, Stchigel& Guarro, Nigrospora sacchari(Speg.) E.W. Mason, N. state ofKhuskia oryzae Hudson, Nodulisporium hyalosporum S.C. Agarwal et J.K. Misra.,Phialophora bubakii(Laxa) Schol-Schwarz, Preussia africana Arenal, Platas&Pelaez, Sordaria macrospora Auersw, Sporormiella irregularis(I. Egel.) Ahmed&Cain, S. muskokensis(Cain) Ahrned& Cain, Stachybotrys atra Cordao。
对分自19种地衣的302株(占总菌株数的17.9%)不产孢内生真菌,根据培养特征,将其划为51个形态型。利用ITS区序列分析,将51个形态型鉴定到42个分类单元,包括7种丝孢菌、33种子囊菌、2种担子菌。
用克隆的方法研究长白山细石蕊陀螺亚种和平盘软地卷无芽变种2种地衣内生真菌的种类组成结果显示,从细石蕊陀螺亚种中克隆到5种内生真菌Cladoniagracilis subsp.turbinata、Eucasphaeria sp.、Tomentella sp.、Tritirachium sp。Hypocreales sp.,其中包含1种担子菌、3种子囊菌、1种丝孢菌。从平盘软地卷无芽变种中克隆到10种内生真菌Aspergillus sydowii、Cordyceps bassiana(无性型Paecilomyces farinosu)、Geomyces pannorum、Lactarius deliciosus、Microdochium phragmitis、Tomentetla sp.、Sebacinaceae sp.、Chaetothyriales sp.、Helotiales sp.、Hypocreales sp.,其中包含3种担子菌、4种子囊菌、3种丝孢菌。
对吉林长白山(6种)、北京百花山(2种)、四川攀枝花(2种)、云南紫溪山(5种)共13种地衣内生真菌种类组成的生态分析结果显示,地衣具有较高的内生真菌定殖率(总平均64.9%)和分离率(总平均0.76),而且地理位置和地衣种类对定殖率和分离率有明显的影响;地理位置对内生真菌丰度和多样性指数有明显的影响,而且在长白山和紫溪山的地衣种类对内生真菌丰度和多样性指数的影响大于在百花山和攀枝花;地理位置对内生真菌的种类组成有明显影响,如长白山、百花山的优势种是Scopulariopsis sp.,而攀枝花和紫溪山的优势种是Xylaria sp.,具有地理分布特性;在同一地点,地衣种类对内生真菌种类组成的影响较小,大多数常见内生真菌种类没有宿主专一性,但是有些常见种类表现出一定的宿主偏好性。