论文部分内容阅读
IL-33（Interlukin-33），一种细胞核因子，是IL-1的家族成员，IL-33在肠道上皮细胞中高表达，提示IL-33在炎症性肠病（IBD）中起潜在作用。IL-33在组织稳态，损伤和修复的调节中发挥重要的作用，最初被认为是在变应性炎症和寄生虫感染期间发现的2型免疫的有效启动子，近年来，发现其在2型固有免疫中发挥重要作用，且在细胞损伤或应激时快速从细胞中释放，起警报素信号的作用。2型固有淋巴样细胞（Innate lymphoid cells,ILC2s）作为固有免疫细胞，可分泌2型适应性免疫相关细胞因子，提示IL-33可通过ILC2参与肠炎的发生发展。 目的： 探究IL-33作为警报素在DSS诱导的肠炎中的作用和机制。 方法： 1.重组IL-33的提取纯化及去除内毒素：用本实验室之前构建的已转入表达IL-33的BL21大肠杆菌菌株，经IPTG诱导，亲和柱层析，凝血酶剪切GST标签，去内毒素处理后，用Western鉴定蛋白，及ELISA检测融合蛋白的生物活性。 2.DSS诱导小鼠肠炎模型:从第0天开始喂3.5%的DSS，第2天和第4天换药，第7天换水，从第0天开始每天小鼠称重记录，第8天处死小鼠收集样品。 3.从第0天开始腹腔注射IL-33（1ug/100uL/day）与PBS（100uL/day），记录小鼠体重变化，测量结肠长度，HE染色及结肠组织病理评分，流式检测结肠相关淋巴组织ILC2及其相关细胞因子比例，和其他细胞如DC(Dendritic cell),Tfh（Follicular helper T cell）,的比例。 4.Rag2-/-小鼠同样用3.5%DSS(Dextran Sulfate Sodium)诱导肠炎，腹腔注射同等量的IL-33和PBS，观察IL-33在Rag2-/-小鼠中的作用，及流式检测mLN里ILC2s的细胞比例。 结果： 1.成功提取纯度较高，具生物活性的IL-33。 2.成功制备DSS诱导的小鼠肠炎模型。 3.诱导肠炎后，与PBS组相比，IL-33能加重小鼠的肠炎，且增高ILC2及其相关细胞因子如IL-4，IL-5，IL-13的比例；IL-33还可增加DC细胞的比例，但对Tfh则没有明显的效应。 4.在Rag2-/-小鼠中，IL-33也能明显增加ILC2的细胞比例，且对小鼠的肠炎同样是加重的表现。 结论： IL-33能提高小鼠体内ILC2的细胞比例，并增加相关细胞因子如IL-4，IL-5，IL-13的表达，加重DSS诱导的肠炎，该效应在缺乏特异性免疫细胞（如T、B细胞）情况下也有效。