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我国商品肉鸡产业正在经历从小规模家庭式向集约化养殖的剧烈转变。集约化养殖场饲养密度较大,当进入寒冷季节,鸡舍通风不良,养殖鸡群呼吸道疾病高发,给养鸡业造成了巨大的损失。研究发现多巴酚丁胺作为β2-肾上腺素能受体激动剂能提高急性肺损伤大鼠模型的肺泡液体清除率,且水通道蛋白的表达发生了变化。但对肉鸡作此方面的研究尚未发现报道。 本试验将15日龄肉鸡随机分为四组(n=6):正常对照组(Control组);急性肺损伤模型组(LPS组);多巴酚丁胺治疗组(LPS+Dobu组);多巴酚丁胺对照组(Dobu组)。通过试验过程中监测测体温和呼吸,结束后采血检查红细胞压积和血气,计算肺湿干重比(W/D),检查肺组织病理学变化及AQP1、AQP5mRNA和蛋白的表达变化,来初步探讨多巴酚丁胺促进肉鸡肺水转运的机制。结果显示: 1.试验过程中肉鸡状况观察:LPS组部分肉鸡嘴里有澄清泡沫状液体流出。LPS组直肠温度、呼吸频率升高明显,与Control组差异显著(P<0.05)。 2.肉鸡红细胞比容、血气分析:结果显示各组的红细胞比容没有显著性差异。LPS组pCO2显著高于Control组和Dobu组(P<0.05);而LPS组pO2显著低于其他三组(P<0.05)。LPS组的pH也显著低于其他三组(P<0.05)。以上结果显示LPS组肉鸡血液内氧气浓度低、二氧化碳浓度高,有酸中毒现象。 3.肺湿干重比(W/D):LPS组肺湿干重比与 Control组相比升高明显,差异极显著(P<0.01);LPS+Dobu组与LPS组相比肺湿干重比值下降,差异显著(P<0.05);而LPS+Dobu组的肺湿干重比仍高于Control组,差异显著(P<0.05)。表明气管内滴注LPS造成了肺湿干重比值的急剧上升,持续静脉内注射多巴酚丁胺能够显著降低肺湿干重比16.1%(P<0.05)。 4.HE染色结果显示 Control组肉鸡的肺小叶与肺小叶之间分界清楚,肺毛细管、肺呼吸管和肺房结构清晰。LPS刺激后部分肺小叶间隔模糊,肺房管腔变狭窄,肺房膈增厚,细胞挤压密集,大量红细胞分布在肺毛细管、血管和三级支气管管腔,肺组织淤血。Dobu+LPS组肺组织结构完整性与LPS组相比稍有好转,但仍存在红细胞淤积等病理现象。证实了LPS组肉鸡确有肺部炎症,肺损伤模型的构建完成。 5.免组结果显示AQP1主要表达在正常的呼吸毛细管上皮和血管内皮。AQP5主要表达于三级支气管上皮细胞。H-Score评分结果表明 LPS组的 AQP1、AQP5的H-Score值均低于Control组且差异极显著(P<0.01);LPS+Dobu组AQP1的H-Score评分略高于LPS组,差异显著(P<0.05);LPS组AQP5与LPS+Dobu组差异不显著。AQP1、AQP5在Control组与Dobu组的表达也无显著性差异。肺损伤后AQP1、AQP5的表达下降,多巴酚丁胺能一定程度上提升AQP1、AQP5的表达。 6.荧光定量PCR结果显示,LPS组中AQP1、AQP5的mRNA表达相比于Control组下降了50.7%、38.9%,与Control组差异显著(P<0.05)。而LPS+Dobu组的AQP1的mRNA表达量相比于 LPS组上升了48.4%,差异显著(P<0.05);LPS+Dobu组的AQP5的mRNA表达相比于LPS的表达上升了38.5%,差异显著(P<0.05)。肺损伤后AQP1、AQP5的mRNA表达量下降,多巴酚丁胺能不同程度上调AQP1、AQP5的mRNA表达量。 7. Western Blotting结果显示,LPS组和Control组的AQP1目的条带与内参带灰度值的比值为0.18、0.94,LPS组AQP1的蛋白表达下降了80.85%;LPS+Dobu组相对灰度值为0.55,与LPS组相比AQP1蛋白表达提高了2.05倍;LPS组和Control组的AQP5相对灰度值为0.15、0.80,AQP5的蛋白表达下降了81.25%;LPS+Dobu组AQP5相对灰度值与LPS组相比提高了2.13倍。 Western Blot结果与免组的H-Score评分结果大致相同,其中LPS组的AQP1、AQP5的蛋白表达下降,多巴酚丁胺能提高肺损伤肉鸡AQP1、AQP5的蛋白表达。多巴酚丁胺对正常肉鸡肺AQP1、AQP5的蛋白表达无影响。 本试验从肺干湿重比、肺水代谢途径中的关键的水通道蛋白的表达变化入手,探讨了多巴酚丁胺对肉鸡肺水肿的影响。试验结果表明,多巴酚丁胺对LPS导致的肉鸡肺水肿有缓解作用。本研究结果显示多巴酚丁胺可能通过增强 AQP1和 AQP5的表达来缓解肉鸡肺水肿。