论文部分内容阅读
目的：
瘙痒是严重影响人类生活质量的健康问题之一，麻黄连翘赤小豆汤在临床证实治疗瘙痒有明确疗效，但现有资料尚不能完全阐明其作用机制。本课题组前期研究表明麻黄连翘赤小豆汤能抑制肥大细胞脱颗粒，改善变态反应性炎症，进一步研究发现，麻黄连翘赤小豆汤可以通过PAR2-TRPV1通路干预Ⅰ型变态反应环节，减轻甚至缓解胆汁淤积性瘙痒。近来研究发现，5-HT是引发胆汁淤积性瘙痒的物质之一，5-HT1a受体是激活GRP相关性瘙痒的关键受体，能同时激活5-HT1a和GRPR，大幅度降低引发痒感的阈值，从而产生瘙痒。GRP/GRPR信号通路是瘙痒的特异性信号通路，GRPR与G蛋白偶联受体结合，激活PLC，使细胞内IP3增加，引起细胞内储存的Ca2+释放和细胞外Ca2+内流，增加细胞内游离Ca2+浓度，激活蛋白激酶C同工酶，引起PKC和MAPK的活性增加，最后发挥生物学效应。本课题通过观察麻黄连翘赤小豆汤对5-HT1a受体和GRPR的调节作用，对大鼠脊髓背角神经元胞内钙离子浓度的影响，探讨其止痒的机制，为进一步研究奠定基础。
方法：
以SD大鼠为研究对象，随机分为空白组、模型组、麻黄连翘赤小豆汤低、中、高剂量组。采用5-HT建立大鼠瘙痒模型，造模完成1天后，药物干预组大鼠分别用4.3g·kg-1、8.6g·kg-1、17.2g·kg-1麻黄连翘赤小豆汤灌胃治疗14天，空白组、模型组用等体积生理盐水灌胃治疗，观察并记录大鼠造模当天，治疗第7天，治疗第14天搔抓次数。治疗完成后，取脊髓背角神经节和麻黄连翘赤小豆汤含药血清，采用免疫印迹法和免疫组织化学法检测脊髓背角神经元处5-HT1a和GRPR的表达水平；运用高效液相色谱-质谱联用方法对检测药物干预组大鼠含药血清中麻黄碱的浓度；钙离子成像法检测脊髓背角神经节胞内钙离子浓度。
结果：
1.麻黄连翘赤小豆汤可以缓解模型大鼠的瘙痒感；与空白组相比，模型组和药物干预组大鼠搔抓行为明显增强，有显著差异性(P＜0.01)，经麻黄连翘赤小豆汤治疗14天后，与模型组大鼠相比，药物干预组大鼠搔抓行为明显减少，有显著差异性(P＜0.05),且高剂量组与中、低剂量组比较治疗效果更好(P＜0.05)。
2.麻黄连翘赤小豆汤能抑制5-HT1a和GRPR的活化；通过免疫印迹法和免疫组织化学法检测发现，与模型组大鼠比较，药物干预组大鼠脊髓背角神经元中5-HT1a和GRPR的含量明显减少。
3.药物干预组大鼠含药血清中存在麻黄碱。
4.麻黄连翘赤小豆汤含药血清能减少脊髓背角神经元胞内游离钙离子浓度；通过钙离子成像技术检测发现；与模型组大鼠比较，药物干预组大鼠脊髓背角神经元中钙离子浓度明显减少(P＜0.01)。
结论：
1.采用5-HT制作瘙痒模型是成功的；
2.经麻黄连翘赤小豆汤治疗后，瘙痒模型大鼠自发性搔抓次数明显减少，提示麻黄连翘赤小豆汤对5-HT引起的瘙痒有一定的止痒作用，5-HT引发的瘙痒可能与风、湿、热邪有关；
3.在5-HT瘙痒模型中，麻黄连翘赤小豆汤可能是通过抑制5-HT1A-GRPR的协同作用，减少细胞内钙离子浓度，从而达到止痒效果。
瘙痒是严重影响人类生活质量的健康问题之一，麻黄连翘赤小豆汤在临床证实治疗瘙痒有明确疗效，但现有资料尚不能完全阐明其作用机制。本课题组前期研究表明麻黄连翘赤小豆汤能抑制肥大细胞脱颗粒，改善变态反应性炎症，进一步研究发现，麻黄连翘赤小豆汤可以通过PAR2-TRPV1通路干预Ⅰ型变态反应环节，减轻甚至缓解胆汁淤积性瘙痒。近来研究发现，5-HT是引发胆汁淤积性瘙痒的物质之一，5-HT1a受体是激活GRP相关性瘙痒的关键受体，能同时激活5-HT1a和GRPR，大幅度降低引发痒感的阈值，从而产生瘙痒。GRP/GRPR信号通路是瘙痒的特异性信号通路，GRPR与G蛋白偶联受体结合，激活PLC，使细胞内IP3增加，引起细胞内储存的Ca2+释放和细胞外Ca2+内流，增加细胞内游离Ca2+浓度，激活蛋白激酶C同工酶，引起PKC和MAPK的活性增加，最后发挥生物学效应。本课题通过观察麻黄连翘赤小豆汤对5-HT1a受体和GRPR的调节作用，对大鼠脊髓背角神经元胞内钙离子浓度的影响，探讨其止痒的机制，为进一步研究奠定基础。
方法：
以SD大鼠为研究对象，随机分为空白组、模型组、麻黄连翘赤小豆汤低、中、高剂量组。采用5-HT建立大鼠瘙痒模型，造模完成1天后，药物干预组大鼠分别用4.3g·kg-1、8.6g·kg-1、17.2g·kg-1麻黄连翘赤小豆汤灌胃治疗14天，空白组、模型组用等体积生理盐水灌胃治疗，观察并记录大鼠造模当天，治疗第7天，治疗第14天搔抓次数。治疗完成后，取脊髓背角神经节和麻黄连翘赤小豆汤含药血清，采用免疫印迹法和免疫组织化学法检测脊髓背角神经元处5-HT1a和GRPR的表达水平；运用高效液相色谱-质谱联用方法对检测药物干预组大鼠含药血清中麻黄碱的浓度；钙离子成像法检测脊髓背角神经节胞内钙离子浓度。
结果：
1.麻黄连翘赤小豆汤可以缓解模型大鼠的瘙痒感；与空白组相比，模型组和药物干预组大鼠搔抓行为明显增强，有显著差异性(P＜0.01)，经麻黄连翘赤小豆汤治疗14天后，与模型组大鼠相比，药物干预组大鼠搔抓行为明显减少，有显著差异性(P＜0.05),且高剂量组与中、低剂量组比较治疗效果更好(P＜0.05)。
2.麻黄连翘赤小豆汤能抑制5-HT1a和GRPR的活化；通过免疫印迹法和免疫组织化学法检测发现，与模型组大鼠比较，药物干预组大鼠脊髓背角神经元中5-HT1a和GRPR的含量明显减少。
3.药物干预组大鼠含药血清中存在麻黄碱。
4.麻黄连翘赤小豆汤含药血清能减少脊髓背角神经元胞内游离钙离子浓度；通过钙离子成像技术检测发现；与模型组大鼠比较，药物干预组大鼠脊髓背角神经元中钙离子浓度明显减少(P＜0.01)。
结论：
1.采用5-HT制作瘙痒模型是成功的；
2.经麻黄连翘赤小豆汤治疗后，瘙痒模型大鼠自发性搔抓次数明显减少，提示麻黄连翘赤小豆汤对5-HT引起的瘙痒有一定的止痒作用，5-HT引发的瘙痒可能与风、湿、热邪有关；
3.在5-HT瘙痒模型中，麻黄连翘赤小豆汤可能是通过抑制5-HT1A-GRPR的协同作用，减少细胞内钙离子浓度，从而达到止痒效果。