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目的：通过检测人巨细胞病毒（HCMV）体外感染绒毛外滋养细胞（EVT）Smad4表达水平的变化的研究，初步探究该病毒经TGFβ/Smad信号通路对EVT功能的影响。方法：1、采用复合酶梯度离心法培养原代EVT，通过免疫细胞化学染色检测CK7、c-erbB-2、Vim等蛋白信号以鉴定细胞来源及纯度。2、培养人胚肺成纤维细胞株MRC5以扩增HCMV AD169实验株，并用Reed-Muench法测其病毒半数细胞感染量TCID50。3、EVT被HCMV感染后，通过免疫荧光细胞化学染色法检测HCMVpp65抗原，判断EVT病毒感染情况。4、MTT法检测并筛选HCMV对EVT细胞体外增殖影响的最小病毒剂量及后续试验的最佳病毒接种量。5、实验分为正常组（EVT）和病毒组（EVT+HCMV），HCMV接种至EVT细胞48h后，利用免疫细胞荧光技术、实时荧光定量PCR技术、Western Blot方法检测各组细胞Smad4表达的水平。6、利用体外细胞侵袭实验，研究HCMV感染EVT细胞后，对EVT体外侵袭能力的影响。结果：1、约95%分离培养的原代细胞内均可见CK7和c-erbB-2表达，Vim偶见表达，提示绒毛组织分离培养的细胞为高纯度的EVT。2、病毒HCMV AD169株测定的TCID50为10-4.21/0.1ml，即将HCMV AD169病毒稀释104.21接种100ul可使50%的细胞发生病变。3、免疫荧光细胞化学染色结果显示，EVT胞浆内可见大量HCMVpp65抗原荧光信号。4、MTT实验结果显示，与正常组比较，HCMV感染48h后，30ul、40ul、50ul病毒液对EVT增殖抑制作用明显（P＜0.05），各组间差异无统计学意义（P＞0.05），故最佳病毒接种剂量为30ul100TCID50HCMV/120ul培养基。5、QT-PCR结果提示，正常组和病毒组中均有TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7、MMP2、MMP9mRNA表达。TGF-β1mRNA在两组中相对表达量分别为1.000±0.050和1.246±0.045，TβRImRNA在两组中相对表达量分别为1.001±0.052和1.317±0.051，TβRII mRNA在两组中相对表达量分别为1.001±0.052和1.296±0.114，Smad2mRNA在两组中相对表达量分别为1.000±0.033和1.380±0.064，Smad4mRNA在两组中相对表达量分别为1.00±0.052和1.36±0.080， Smad7mRNA在两组中相对表达量分别为1.317±0.051和1.001±0.052，MMP2mRNA在两组中相对表达量分别为1.000±0.037和0.912±0.016，MMP9mRNA在两组中相对表达量分别为1.000±0.037和0.909±0.025，Smad1mRNA在两组中相对表达量分别为1.000±0.120和1.040±0.040，Smad5mRNA在两组中相对表达量分别为1.010±0.130和1.100±0.160，Smad6mRNA在两组中相对表达量分别为1.010±0.130和0.840±0.040。与正常组比较，病毒组中TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad2、Smad3、Smad4mRNA表达水平明显增高，差异具有统计学意义（P＜0.05），Smad7、MMP2、MMP9mRNA表达相对降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。两组EVT中Smad1、Smad5、Smad6mRNA表达无差异，无统计学意义（P＞0.05）。6、免疫细胞荧光染色显示，Smad4蛋白在正常组和病毒组EVT中均表达，其在两组中的平均光密度(AOD）分别为0.376±0.044和0.530±0.086。与正常组比较，病毒组EVT中Smad4蛋白表达水平明显增高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。7、Western Blot实验所测定的结果提示，Smad4蛋白在正常组和病毒组细胞中均表达，且在两组中Smad4蛋白表达的灰度值（GDR）分别为0.518±0.053和0.884±0.093，与正常组比较，病毒组中Smad4蛋白表达水平增高明显（P＜0.05）。8、体外细胞侵袭实验提示，正常组和病毒组EVT均可穿过Matrigel基质胶，其两组穿膜细胞数分别为（56.1±3.06）个和（45.7±2.73）个（P＜0.05），提示HCMV抑制EVT侵袭活力。结论：1、HCMV在体外可能通过TGF-β/Smads信号通路来抑制原代EVT细胞的增殖及其侵袭，并能使细胞中Smad4基因表达水平增高。2、Smad4可能在HCMV宫内感染导致异常妊娠的机制中起重要作用，其机制可能是HCMV损伤EVT，正性调控信号通路TGF-β族配体→受体→Smad蛋白→转录因子→DNA，促进Smad4表达，最终导致EVT侵润能力不足，胚胎着床太浅，导致流产等异常妊娠的发生。