CD4+CD29+T细胞与Th1/Th2在溃疡性结肠炎中医证型中的作用机制研究

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目的:  通过病证结合的方法建立中医证型溃疡性结肠炎动物模型,并与临床研究相结合,探讨CD4+CD29+T细胞与Th1/Th2在不同证型溃疡性结肠炎中的表达及其相关性。  方法:  1.前期标本收集  以南方医院消化内科门诊、住院部及消化内镜中心的溃疡性结肠炎患者31例及健康体检者33例为研究对象,根据其证型分为健康组(15人)、单纯湿热组(18人)、非湿热UC组(16人)和湿热UC组(15人),收集外周血和肠粘膜。  2.中医证型溃疡性结肠炎大鼠模型的建立与研究  60只SD大鼠随机分为正常组(15只)、湿热组(30只)和脾虚UC组(15只)。通过病证结合的方法建立相应证型的UC模型:采用高湿高温+高脂高糖饮食的方法建立湿热模型,采用隔日足量饮食+番泻叶灌胃+游泳疲劳的方法建立脾虚模型,以上造模持续8周;于第6周湿热组随机分为单纯湿热组(15只)和湿热UC组(15只),在脾虚、湿热造模的基础上加用2,4-二硝基氯苯(DNCB)/乙酸法建立相应证型的UC模型。于第9周处死大鼠,收集外周血和结肠组织。  3.检测方法  采用流式细胞术和免疫双荧光法检测外周血和结肠中CD4+CD29+T细胞的表达水平,采用免疫组化法观察结肠T-bet和Gata-3的表达水平,采用Elisa法检测外周血和结肠组织匀浆中IFN-γ、IL-12和IL-4的表达水平。  结果:  动物实验及临床实验结果均显示:  1.非湿热(脾虚)UC组和湿热UC组CD4+CD29+、T-bet、IFN-γ、IL-12较正常组明显升高(P<0.05),湿热UC组CD4+CD29+、T-bet、IFN-γ、IL-12较非湿热(脾虚)UC组升高(P<0.05)。  2.非湿热(脾虚)UC组Gata-3、IL-4较湿热UC组高(P<0.05)。  3.CD4+CD29+与T-bet、IFN-γ、 IL-12呈正相关(P<0.05)。  结论:  1.通过病症结合方法可分别建立脾虚、湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型,且在症状、病理及免疫上符合UC诊断。  2.湿热型UC大鼠中有Th0向Th1分化的倾向,脾虚型UC大鼠中有Th0向Th2分化的倾向。  3.UC发病与CD4+CD29+T细胞增高、Th1/Th2失衡有关。其发病机制可能为在初期IFN-γ、IL-12刺激CD4+CD29+T细胞大量表达,其中一部分以记忆性CD4+CD29+T细胞的形式存储下来,以Th1增高为主;中后期少量IFN-γ、IL-12刺激记忆性CD4+CD29+T细胞大量表达IL-4等,以Th2增高为主。
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