【摘 要】
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神经营养素是一类对中枢和外周神经系统有着深刻影响的化学物质,它调控着生长和分化.NGF是神经营养素家族中最早被发现的成员,它通过低亲和力受体p75NTR和特异性高亲和力受体
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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神经营养素是一类对中枢和外周神经系统有着深刻影响的化学物质,它调控着生长和分化.NGF是神经营养素家族中最早被发现的成员,它通过低亲和力受体p75NTR和特异性高亲和力受体TrkA,调节神经原的存活,促进神经原的生长以及上调特定神经原的功能比如介导疼痛和炎症反应等.这些作用都提示NGF的拮抗剂和激动剂可以在上述过程中发挥重要作用.但是,NGF不易透过血脑屏障限制了NGF在临床上的使用.因此研发具有NGF受体结合特性,可以作为激动剂或拮抗剂的NGF样的小分子模拟物将在发展NGF潜在的临床应用中具有重要的意义.本组前期工作中利用R2L1细胞进行差异筛噬菌体随机肽库:12肽库和7肽库.获得了两个优势序列,同时合成了相应的短肽.通过ELISA方法和细胞结合的方法证实了所获得的噬菌体以及合成的短肽能够与p75NTR相结合.研究了所获得的噬菌体以及合成的短肽对R2L1细胞去血清后凋亡的抑制作用.本论文在本组前期工作的基础上,对应用噬菌体展示文库筛选TrkA的模拟配基做了初步的研究,完成了以下工作:1.以小鼠骨髓瘤细胞NSO表达体系表达的重组的人TrkA(recombinant humanTrkA,rhTrkA)蛋白为靶蛋白筛选噬菌体随机12肽库,获得了一个优势序列:DSFSPFRIPWPA 2.利用DNA重组技术,构建表达载体,并在大肠杆菌中表达融合蛋白MBP-TrkA膜外区蛋白.经直链淀粉亲和柱层析得到较纯的融合蛋白.3.通过ELISA方法证实了所获得的噬菌体肽能够与重组的TrkA膜外区蛋白相结合.4.通过细胞结合的方法初步证实了所获得的噬菌体能够与细胞表面的TrkA结合.综合这些实验结果,我们可以看出噬菌体展示技术是筛选模拟配基的一个有效方法,通过筛选噬菌体随机12肽库得到的与TrkA特异结合的模拟短肽,为进一步合成短肽,研究其功能和生物活性打下了基础.
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