人鼻咽癌鼻咽分泌物蛋白双向凝胶电泳图谱的建立

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鼻咽癌是我国发病率最高的十大恶性肿瘤之一,以广东、广西、湖南、福建南方四省最高。鼻咽癌的发生是多基因、多因素、多阶段参与的一系列复杂过程,其基因水平的变化必然导致大量分泌性蛋白质的改变。分泌性蛋白是指分泌到细胞膜外的蛋白质,包括血液和组织液中的细胞外基质、生长因子、细胞因子、肽类激素、酶类等。分泌性蛋白质扮演着细胞间信息传递的重要角色,以旁分泌、自分泌等方式发挥生理或病理作用。在肿瘤患者的体液中存在许多与肿瘤发生、发展相关的蛋白质分子,这些分子的存在即能直接刺激肿瘤细胞的生长维持其异型性的特点,又与肿瘤的侵袭转移这一生物学特性密切相关,可以作为肿瘤诊断的标志物。鼻咽分泌物这一体液中亦可能存在与鼻咽癌发生、发展相关的肿瘤标志物。本研究从分泌物蛋白质组学的角度出发,采用蛋白质组学技术分离鼻咽癌患者鼻咽分泌物蛋白,寻找分泌物蛋白的差异表达,并采用免疫组织化学方法检测AnnexinA5蛋白在鼻咽癌组织中的差异表达。目的:建立人鼻咽癌组和正常对照组鼻咽分泌物蛋白双向凝胶电泳图谱,寻找鼻咽癌早期诊断和预后的标志物。探讨AnnexinA5与鼻咽癌发生、发展的相关性。方法:采集鼻咽癌患者及健康人鼻咽分泌物,分别提取其总蛋白质,利用双向凝胶电泳技术(2-DE),建立双向凝胶电泳图谱,应用Imagescanner扫描仪对染色后的胶图进行图像扫描,并用PDquest图象分析软件进行凝胶图像分析,比较差异表达的蛋白质点。收集人鼻咽癌组织34例,鼻咽炎组织10例,石蜡包埋切片,行免疫组织化学染色,应用图像测定仪及SPSS11.5统计分析软件行图像测定与数据分析,半定量、半定性测定AnnexinA5蛋白表达的差异,分析其表达与鼻咽癌发生的相关性。结果:1)人鼻咽癌组和正常对照组鼻咽分泌物2-DE凝胶共筛选出11个差异表达的蛋白质点,其中3个蛋白质点上调,8个蛋白质点下调。2)人鼻咽癌组AnnexinA5蛋白的平均表达水平高于鼻咽炎组,其差异具有显著性(P<0.01),有统计学意义。AnnexinA5蛋白的表达水平与鼻咽癌颈淋巴结转移无相关性(P>0.05)。结论:1)建立了鼻咽癌患者与正常人的鼻咽分泌物总蛋白的2-DE图谱。2)分析发现了两组2-DE图谱部分差异表达的蛋白质点。3)用免疫组化法进一步检测了AnnexinA5在鼻咽癌原发组织中高表达,AnnexinA5可能是鼻咽癌的生物标志物。
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