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在mRNA翻译成为蛋白质之后,有时会共价修饰某些蛋白质上的特定氨基酸残基,该过程被称为蛋白质翻译后修饰(PTM)。其中磷酸化、糖基化、瓜氨酸化、糖化、羟基化和泛素化较为常见。不同的修饰方式涉及不同的氨基酸,存在于不同的疾病生理病理过程,它们常常伴随多种自身免疫性疾病(AID)的发生。瓜氨酸化(Citrullination)是一种酶介导的PTM方式。它是在Ca2+的参与和肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PAD)催化作用下把精氨酸(Arg)残基的胍基转变成脲基,生成瓜氨酸(Cit)残基。以前通常认为瓜氨酸化是类风湿性关节炎(RA)所特异的。但是随着研究地不断深入,在牛皮癣、多发性硬化症、纤维化、老年痴呆症和肿瘤等疾病中也发现了瓜氨酸化。氨甲酰化(Carbamylation/Homocitrullination)的具体过程是蛋白质的赖氨酸残基在尿素的衍生物—氰酸酯的作用下转变成高瓜氨酸(Hcit)残基,常存在于尿毒症、肾衰竭、动脉粥样硬化和冠状动脉疾病等症状中。本文展开了对瓜氨酸化和氨甲酰化的研究,半抗原的设计与合成,制备抗Citrulline抗体和抗Carbamylation抗体,着力于ELISA检测方法的建立。主要研究结果如下：(1)Citrulline半抗原的设计借鉴了氨基脲(SEM)、呋喃唑酮代谢物(AOZ)、福美双(Thiram)和磷酸化酪氨酸半抗原设计的方法,增加了半抗原的复杂性,设计并合成了Citrulline人工抗原。同时参照文献也合成了Carbamylation人工抗原。BCA法测定了5个免疫原和3个包被原的浓度,SDS-PAGE法鉴定了人工抗原。(2)免疫大白兔和小鼠后,检测到了抗Citrulline抗体和抗Carbamylation抗体。抗Cit-G-BSA兔子抗血清效价效价均大于3.2×104,抗体特性同商品化的多抗。抗cBSA/cKLH小鼠抗血清效价效价均大于6.4×104。(3)取目的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合,经3轮细胞亚克隆操作后,建立起了4个抗氨甲酰化蛋白细胞株,分别命名为13C11-F12-H2-F4、14E5-E8-G3-D8.14E10-F6-F7-E5和11EE3-F9-G5-D8。(4)通过动物体内诱生法和蛋白A亲和层析获得了2个抗Carbamylation单克隆抗体,命名为mAb-13C11和mAb-10E3,效价均大于3.14×106,亚类均为IgG2b,都特异性地识别氨甲酰化的蛋白质,不识别正常蛋白。(5)引入双抗夹心法和生物素-亲和素系统,利用mAb-13C11建立起了ELISA检测方法,确定最佳条件为：mAb-13C1120μg/mL,1%BSA、Bio-13C11SA-HRP12.5ng/mL和TMB20min。对氨甲酰化蛋白的检测已达到ng级别。成功地检测到冠状动脉粥样硬化性心脏病、动脉粥样硬化心肌梗塞和关节炎病人滑液疾病样本中氨甲酰化蛋白的含量与对照组有显著差异。本文初步探索了citrlline半抗原的设计,同时为氨甲酰化蛋白质检测试剂盒(Sandwich ELISA)和特定疾病检测试剂盒(Sandwich ELISA)的研制奠定了基础。