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实验目的瘢痕是人体在组织创伤修复过程中的必然产物,任何创伤的愈合均伴有不同程度的瘢痕形成,根据其组织学和形态学区别,可分为四类：表浅性瘢痕、萎缩瘢痕性、增生性瘢痕,瘢痕疙瘩。其中增生性瘢痕(hypertrophic scar, HTS)和瘢痕疙瘩(keloid, K)又统称为病理性瘢痕(pathological scars)。病理性瘢痕是临床上的常见病症,病因不明确,病变持续增长、易复发、反复破溃可形成瘢痕癌。影响美观及功能。目前尚无有效的预防和治疗方法。病理性瘢痕的发生发展涉及众多方面,错综复杂,是各种细胞及细胞因子相互作用、调控的结果是一种多种细胞因子参与、受多因素影响的病理过程,且缺乏可行的动态动物模型,对病理性瘢痕进一步的研究受到限制。因此。病理性瘢痕形成的具体机理仍不清晰。本研究从目前日益受到重视的瘢痕形成机制的免疫学假说出发,首次研究Thl趋化因子—干扰素诱导蛋白10(CXCL10/IP-10)和干扰素诱导单核因子(CXCL9/MIG)在病理性瘢痕中的表达情况,以探讨CXC族免疫相关的Th1趋化因子在病理性瘢痕组织发病机制中的作用。实验方法瘢痕疙瘩患者28例为K组,男性12例,女性16例,年龄9-35岁,平均18.6岁,病程6月-3年(平均8.3月),瘢痕分布于前胸13例、肩部12例、耳廓3例。增生性瘢痕患者34例为HS组,男性19例,女性15例,年龄7-42岁,平均21.4岁,病程6月～3.5年(平均10.6月),瘢痕分布于面颈部16例、四肢15例、胸部3例。瘢痕表面无破溃及感染,术前未行激光、冷冻、外用或局部注射药物等任何治疗,患者无皮肤、免疫及传染性疾病。同时选取其他整形美容手术患者切除的正常皮肤组织20例,作为对照组,记为N组。将新鲜组织置于冰盒内转运到实验室,标本经OCT包埋,深低温冰箱(-80℃)冷冻保存,实验前制作切片,切片厚5μm。取瘢痕疙瘩28例、增生性瘢痕34例、正常皮肤20例组织切片,贴于明胶载玻片上,室温丙酮固定30min,干燥30min后,PBS冲洗3次(3min／次)；再经3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶处理10 min,PBS冲洗3次,免疫血清阻断非特异性抗原10 min后,每个标本分别加30μl一抗即IP-10或MIG(1：100稀释)；4℃湿盒过夜,PBS冲洗3次后,滴加1：200稀释生物素化二抗；37℃恒温水箱孵育20min,PBS冲洗3次,滴加1：200稀释ABC复合物即三抗；37℃恒温孵育20min,PBS冲洗3次,滴加50μl的AEC染液复染,镜下观察控制染色效果,染色时间5～10min,自来水洗净,室温晾干；苏木精复染3-5s；用流水冲洗30min,氨水反蓝。阴性对照组用PBS缓冲液代替一抗。封片,保存,镜下观察,照相。结果判断标准：IP-10和MIG着色后,细胞浆中可见染成红色、粉红色的结构,记为阳性细胞,若不见红染结构即为阴性细胞。每例标本各取10个高倍视野(╳400)计数,双人双盲统计阳性细胞占同类细胞总数的百分率(阳性率)和阳性细胞的染色强度,并据此分类：①阳性率<10%,为阴性(-)。②阳性率10%-30%,胞浆染色呈淡红色,为(+)。③阳性率30%-60%,胞浆染色呈红色,为(++)。④阳性率>60%,胞浆染色呈深红色,为(+++)。采用SPSS11.5统计软件进行X2检验。统计分析,取a=0.05,即P<0.05时认为有统计学意义。实验结果一、IP-10和MIG在病理性瘢痕组织中的定位IP-10和MIG弥漫性分布于真皮内成纤维细胞,局部分布于表皮内角质形成细胞中,呈颗粒状,突出定位于细胞浆内。二、IP-10和MIG在成纤维细胞中的表达及对比IP-10和MIG在K、HS组中呈高表达,与N组比较其差异具有统计学意义(P<0.05),但K、HS组之间比较其差异无统计学意义(P>0.05)。结论IP-10和MIG可能通过趋化Thl淋巴细胞定向迁移引发一系列免疫炎性反应,促进病理性瘢痕的形成。