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目的:
视网膜新生血管形成是眼科许多常见疾病的病理表现,是造成视力严重损伤、甚至失明的重要因素。目前已有报道,洋地黄类药物地高辛对视网膜新生血管和脉络膜新生血管有抑制作用。本课题通过制作小鼠氧诱导的视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)模型,来观察洋地黄类药物西地兰对氧诱导的视网膜新生血管及无灌注区的影响,为视网膜新生血管治疗提供新的实验性药物。
方法:
(1)将出生后第7天(Postnatal7,P7)的C57BL/6J乳鼠连同母鼠一起放入氧浓度为75％±1％的环境中饲养5天(至P12天),取出后在正常氧环境下(氧浓度为21％)继续饲养5天。在P17天时,分别做眼球冰冻病理切片、视网膜铺片isolectin GS染色和FITC-dextran心脏灌注视网膜铺片。以正常乳鼠作为对照,观察视网膜新生血管的形成,并对isolectin GS染色和FITC-dextran心脏灌注两种方法分析视网膜新生血管及无灌注区的优劣进行评价,以指导以后实验；
(2)氧诱导的C57BL/6J乳鼠在P12天时,左眼注射等体积不同剂量(0.025μg、0.05μg、0.1μg和0.2μg)的西地兰,右眼注射等体积的磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution,PBS)作对照,在P17天制作视网膜铺片,行isolectinGS染色,计算视网膜新生血管和无灌注区面积；
(3)氧诱导的C57BL/6J乳鼠在P15天时,左眼注射0.2μg西地兰,右眼注射等体积的PBS作对照,在P17天时进行视网膜铺片isolectin GS染色,计算视网膜新生血管和无灌注区面积；
(4)氧诱导的C57BL/6J乳鼠在P12天时,左眼注射0.2μg西地兰,右眼未注射任何液体作对照,在P17天时先进行FITC-dextran心脏灌注视网膜染色,荧光显微镜下观察记录后,再进行视网膜铺片isolectin GS染色,以评价血管灌注情况。
结果:
(1)眼球冰冻病理切片、FITC-dextran心脏灌注视网膜染色和视网膜铺片isolectin GS染色均能显示出视网膜新生血管,后两者还可以观察到视网膜中央无灌注区,其中视网膜铺片isolectin GS染色在评价视网膜新生血管时可靠性更高,不同观察者间一致性较高；
(2)P12天时注射0.025μg西地兰对视网膜新生血管及无灌注区无明显干预作用(p>0.05),而0.05μg、0.1μg、0.2μg西地兰对视网膜新生血管有明显的抑制作用(p<0.05),显著减少无灌注区的面积,并且抑制作用随着剂量逐步增加而增强；
(3)P15天时注射0.2μg西地兰对视网膜无灌注区面积无明显抑制作用(p>.05),但显著地抑制了视网膜新生血管的形成(p<0.05),抑制作用不及P12天时注射0.2μg西地兰:
(4)P12天时注射0.2μg西地兰治疗后,P17天行FITC-dextran心脏灌注染色证实,大部分重建的血管已有血液灌注。
结论:
本研究成功制作了氧诱导视网膜病变模型。研究表明,西地兰对氧诱导的视网膜新生血管有抑制作用,能促进无灌注区的血管重建,其作用具有剂量依赖性和时间依赖性。提示西地兰可能具有治疗视网膜新生血管的潜能。