分析BDNF介导的三种生物碱镇痛作用机制研究

来源 :长春中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:coldcoffee_10
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目的:  分析BDNF介导的延胡索乙素、磷酸可待因、盐酸美沙酮镇痛作用机制的初步研究。  方法:  通过体内和体外实验,验证对BDNF介导的延胡索乙素、磷酸可待因、盐酸美沙酮镇痛作用机制的初步研究。  1.体内实验首先筛选三种药物的最佳给药浓度,然后转染siRNA建立SH-SY5Y细胞BDNF基因沉默模型,通过延胡索乙素、磷酸可待因、盐酸美沙酮分别给药正常细胞和基因沉默细胞,提取总RNA,qPCR技术对目的基因MOR(u-Opioid Receptor)进行检测。  2.体外实验对BDNF基因敲除小鼠与正常小鼠分别给药延胡索乙素、磷酸可待因、盐酸美沙酮高、中、低剂量,连续五天,每天早晚给药,进行热板反应、醋酸扭体反应实验测这三种药物的镇痛作用。然后进行冰上取脑,取小鼠脑中的海马体,免疫组化检测目的基因MOR在小鼠海马中表达的情况;qPCR技术对目的基因MOR进行检测;Western Blotting技术对目的蛋白MOR检测。  结果:  1.体内实验:延胡索乙素、磷酸可待因、盐酸美沙酮的最佳给药浓度分别为42.5umoL、2.03umoL、0.92umoL、;BDNF基因沉默模型建立成功,siRNA转染后BDNF的表达下降(p<0.05)。转染前给药后MOR的表达水平与对照组相比,延胡索乙素组未对MOR的表达水平造成影响;磷酸可待因、盐酸美沙酮组,与对照组相比,MOR的表达有所上升(p<0.05)。  2.体外实验:热板反应、醋酸扭体反应均表明小鼠缺少BDNF基因时,其对痛更为敏感,延胡索乙素、磷酸可待因、盐酸美沙酮镇痛作用依次加强;免疫组化、qPCR结果显示,BDNF基因敲除小鼠与正常小鼠(野生型小鼠)相比,对照组的MOR表达减少,延胡索乙素组的MOR表达未发生明显变化,磷酸可待因组、盐酸美沙酮组的MOR表达减少(p<0.05);组内比较,无论是正常小鼠(野生型小鼠)还是BDNF基因敲除小鼠,与对照组相比,延胡索乙素组的MOR表达未发生明显变化,磷酸可待因组、盐酸美沙酮组的MOR表达增加(p<0.05)。Western Blotting实验证明,三种药物给予小鼠三种药物的最大剂量时,MOR表达情况与qPCR结果显示一致。  结论:  BDNF基因存在与否,延胡索乙素的镇痛作用机制均与MOR表达无关,磷酸可待因、盐酸美沙酮使MOR表达增多;相比较BDNF基因存在,BDNF基因缺少时,磷酸可待因、盐酸美沙酮组MOR表达减少,磷酸可待因、盐酸美沙酮的镇痛作用机制与MOR表达减少有关。
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