论文部分内容阅读
肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）每年会造成超过60万人的死亡，是全球癌症引发死亡的第三大原因。早期肝癌是可以通过肝切除和肝移植手术等治疗手段治愈的，但这只能用于少数符合要求的患者。不能采用手术治疗的患者必须得忍受长期化学治疗带来的毒副作用，且复发率高。食物中的天然多酚物质因其对癌症有较好的预防和治疗效果，且毒副作用小，成为癌症防治药物的研究热点。原花青素是一类广泛存在于日常饮食中的天然多酚类化合物，具有高效的抗氧化和防癌作用。但是不同来源的原花青素提取物对肿瘤的作用效果有很大差异，机制也不同，而且不同成分对肿瘤的作用效果尚不清楚。各类原花青素中分布最广的是二聚体，葡萄籽原花青素B2（Grape seed procyanidin B2,GSPB2）是葡萄籽提取物的主要成分，在此我们研究不同浓度GSPB2（纯度>98％）对肝癌细胞HepG2细胞行为学的作用，并检测细胞PI-3K/PTEN/Akt/mTOR信号通路关键分子活性的变化，为原花青素临床试验研究提供数据及理论支持。 首先分别用MTT法、PI染色、Annexin V-FITC/PI染色、Transwell体外迁移模型以及Matrigel体外三维培养模型检测不同浓度的GSPB2对HepG2细胞的生存率、细胞周期分布、细胞凋亡作用、细胞迁移能力以及管样形成能力的影响，实验结果显示随着浓度的升高GSPB2对HepG2细胞的生存率抑制效果越明显(P<0.05)，但对正常肝细胞株L-02细胞无明显抑制作用(P>0.05)。在不同浓度GSPB2的作用下，HepG2细胞G0/G1期所占比例变化不明显(P>0.05)，并且GSPB2作用24h，对HepG2细胞无明显诱导细胞凋亡作用(P>0.05)。随着GSPB2作用浓度的增加，HepG2细胞的迁移能力和管样形成能力会先受到明显抑制继而这种抑制作用趋于不明显，低浓度的GSPB2对HepG2细胞的迁移能力和管样形成能力抑制更为明显。 其次，已知PI-3K/PTEN/Akt/mTOR信号通路是肿瘤生长、发展和恶化的重要信号通路。我们用western blotting检测到了GSPB2对HepG2细胞PI-3K/PTEN/Akt/mTOR信号通路中关键分子的表达及活性影响，结果显示，不同浓度的GSPB2对此信号通路中PI-3K（p110α）和p-Akt的表达以及PTEN和mTOR的磷酸化水平作用不同。具体结果是：低浓度的GSPB2可以有效抑制PI-3K（p110α）和 p-Akt的表达、降低PTEN和mTOR的磷酸化水平(P>0.05)，影响此PI-3K/PTEN/Akt/mTOR通路活性，而高浓度处理组会明显减弱这种抑制作用。ELISA检测了GSPB2作用下HepG2细胞分泌VEGF的能力，结果显示：低浓度的GSPB2显著降低VEGF的分泌水平，而高浓度组作用不明显。 GSPB2对HepG2迁移和成管的抑制作用不会随着浓度的增高而增强，低浓度的GSPB2可以抑制肝癌细胞的迁移和成管，并且可以有效抑制PI-3K/PTEN/Akt/mTOR信号通路的活化，低浓度 GSPB2可以作为潜在的PI-3K/PTEN/Akt/mTOR信号通路抑制剂而发挥抑制肿瘤迁移和成管的作用。