人sFlt-1基因片段转染对缺氧、高糖下内皮细胞VEGF的ERK1/2、PI3K/Akt信号通路的影响

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目的:比较sFlt-1受体胞外第2-3区和第2-4区对缺氧、高糖条件下血管内皮细胞增殖、迁移、视网膜血管通透性改变及p44/p42MAPK、PI3K/Akt信号通路的影响。 方法:以RT-PCR法从人胎盘组织cDNA文库中扩增出sFlt-1胞外第2-3区和第2-4区,连接入pcDNA3.1载体后电泳及测序鉴定;以羧甲基化葡聚糖纳米磁颗粒为基因载体分别携带两种重组质粒,转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)后分别进行正常、缺氧和高糖条件下的培养。MTT法检测各组HUVEC的增殖;光学低倍镜下观察HUVEC的迁移;分光光度计检测兔视网膜下注射适量各组细胞培养上清液对后视网膜血管对Evan’s blue染料的渗漏量;Western blot法检测各组细胞ERK1/2和PI3K/Akt信号通路下游特异性磷酸化蛋白 p-ERK1/2、p-Akt的表达水平。 结果:经过pcDNA3.1/sFlt-1(2-3)或pcDNA3.1/sFlt-1(2-4)转染的HUVEC在正常条件下的增殖、迁移及p-ERK1/2 mRNA和蛋白的表达较转染前没有明显改变(p>0.05),而经过两种重组质粒转染的HUVEC在缺氧和高糖条件下的增殖、迁移及p-ERK1/2 mRNA和蛋白的表达较转染前均明显下降(p<0.01);两种重组质粒对缺氧和高糖条件下HUVEC增殖、迁移、视网膜血管通透性的改变及ERK1/2、PI3K/Akt信号通路的影响无显著性差异(p>0.05)。 结论:sFlt-1受体胞外第2-3区和第2-4区均可抑制缺氧和高糖条件下HUVEC的增殖、迁移、视网膜血管通透性改变及p44/p42MAPK、PI3K/Akt信号通路,且两种受体基因片段的作用无明显差异。
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