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蛋白磷酸酶4(PP4)是一种在进化中高度保守的丝/苏氨酸型蛋白磷酸酶PP2A家族的重要成员,其催化亚基PP4C通过与不同的调节亚基相结合,形成不同的磷酸酶复合体,在细胞中发挥重要作用,已有报道,它能使DNA受损后形成的γHt2AX去磷酸化,参与DNA损伤修复过程。其在酿酒酵母等多个物种中的同源物都在DNA损伤修复过程中发挥作用。
白色念珠菌是一种机会性致病真菌,其明显特征是可以根据不同的生活环境在三种形念之间转变,这三种形态分别是:酵母形态、真菌丝形态以及介于两者之间的假菌丝形态,这三种形态之间的转变与其致病性密切相关。与白色念珠菌形态转变相关的信号传导通路除了两条经典通路:cAMP/PKA通路以及MAPK通路,最近又有研究表明,细胞周期异常也能导致细胞在非诱导条件下出现极状生长。
本课题组所关注的Capph3是PP4C在白色念珠菌中的同源物,我们主要围绕其在DNA损伤修复中的作用进行实验设计。结果发现,当用DNA损伤试剂MMS处理细胞后,Capph3Δ细胞和野生型细胞都呈现假菌丝表型,野生型细胞周期被阻滞到G2/M期,Capph3Δ细胞则出现S期阻滞。移除MMS后,野生型细胞逐渐由假菌丝形态恢复到酵母形态,恢复正常的细胞周期,但是Capph3Δ细胞则持续假菌丝生长,细胞周期在释放4h后仍被阻滞在S期。所以,Capph3参与DNA损伤修复过程,并在其中发挥着不可替代的作用。最后我们通过条件摸索,成功建立了应用双向电泳技术研究白色念珠菌DNA损伤修复中蛋白差异表达的方法,并通过质谱分析发现,Capph3Δ细胞中一些与蛋白合成、运输相关的蛋白以及热激蛋白表达都显著下调,而与DNA复制、染色体分离相关的蛋白Dot5不表达了。我们猜测这些是导致细胞形态转变、周期阻滞的一个因为。这部分工作为我们以后的研究打下了基础,具有开创意义。