【摘 要】
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猪链球菌(Streptococcus suis，S. suis)是一种革兰氏阳性、兼性厌氧性球菌，根据荚膜多糖抗原特性的不同，可分为35个血清型，即1-34型和1/2型。其中2型流行最广，致病力也最强，但在近
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猪链球菌(Streptococcus suis，S. suis)是一种革兰氏阳性、兼性厌氧性球菌，根据荚膜多糖抗原特性的不同，可分为35个血清型，即1-34型和1/2型。其中2型流行最广，致病力也最强，但在近几年的流行病学调查中发现，7型和9型S. suis也是经常分离到的血清型。目前，全菌疫苗是研究的热点，但只能对同源菌或相同血清型提供保护，对于其他血清型的S. suis免疫保护效果不佳，针对一些毒力因子而研制的亚单位疫苗也已经制作出来，但由于其缺乏一定的免疫原性，而导致免疫效果不好。因此，为了更好的预防和控制S. suis病，提供有更好的保护效果的疫苗候选分子，我们选用3株S. suis分离株即2型S. suis GD、7型S. suis WH和9型S. suis ZD分别进行全菌灭活，灭活后以3×108CFU的剂量3次免疫小鼠，三免后一周使用同源菌分别进行细菌攻毒试验，通过对抗体水平检测、血液、组织内细菌载量检测、病理变化观察以及存活率统计等指标，筛选出一株免疫保护效果好的菌株来进行下一步试验，即反应原性蛋白的筛选。动物实验结果显示，3株S. suis分离株在免疫小鼠后，均能刺激机体产生较高水平的抗体，而对照组小鼠没有抗体产生；经免疫的小鼠进行同源菌攻毒后，GD、WH、ZD组存活率分别为62.5%、87.5%和75%；血液、组织内细菌载量检测结果显示，免疫组小鼠血液、组织内的细菌载量均显著少于对照组，且WH免疫组小鼠血液内的细菌载量最低；病理变化观察结果显示，免疫组小鼠均未见明显病变，而对照组小鼠则呈现出典型的脑膜炎、心内膜炎等现象，病变严重。总结以上结果，7型S. suis WH灭活后全菌免疫小鼠，免疫效果最好，保护率最高，因此选用该菌株应用双向电泳结合蛋白质免疫杂交技术，对其进行反应原性蛋白的筛选。本实验应用免疫蛋白质组学技术建立了7型S. suis WH全菌蛋白的双向电泳体系，获得了分辨率及重复性良好的双向电泳（2-DE）图谱。并结合Western blot方法筛选到3个具有反应原性的蛋白质点，后经质谱鉴定其归属于1个蛋白，即乳酸脱氢酶（LDH）。生物信息学预测该蛋白分子质量为35420u，理论等电点为5.05，具有2个跨膜区，分别位于10-28位和110-129位。并根据预测分析成功模拟了蛋白质三维结构。对其进行原核表达后，在目的蛋白大小处有明显条带，并结合Western blot方法验证其反应原性，结果显示LDH反应原性良好，有望作为预防S. suis病的有效疫苗候选分子。
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