【摘 要】
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反义核酸是以mRNA的一段或病毒RNA为靶的寡核苷酸分子.通过与靶序列的特异识别和结合,反义核酸可以调控基因表达,即干扰遗传信息从核酸向蛋白的传递,从而发挥治疗的作用.核糖
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反义核酸是以mRNA的一段或病毒RNA为靶的寡核苷酸分子.通过与靶序列的特异识别和结合,反义核酸可以调控基因表达,即干扰遗传信息从核酸向蛋白的传递,从而发挥治疗的作用.核糖核酸酶H(RNase H)是一种内源性酶,它催化水解RNA/DNA杂交链中的RNA链.这种酶广泛存在与各种组织中,并且在DNA复制过程中扮演重要角色,所以激活RNase H切割靶RNA是反义核酸的重要机理之一.本论文旨在研究异核苷掺入寡核苷酸的合成及其对RNase H激活的能力.以D-葡萄糖为原料,通过在酸性醇溶液中的转环,经六步反应得到关键的中间体环氧化合物6.为了得到糖环6-OH分别由烯丙基和苯甲酰基保护的异核苷,采取了不同的合成策略.通过碱基直对环氧化合物6开环得到异核苷后,再用苯甲酸酐选择性地保护6-OH;而烯炳基保护的异核苷的合成是先得到烯炳基环氧化合物7,然后用碱基对7进行开环反应.保护好的异核苷和亚磷酰化试剂反应得到了用于合成杂寡核苷酸的单体23,24,25.以SARS-Co V RNA片段为靶,设计并合成了五条杂寡核苷酸S1,S2,S3,S4和S5.这些杂寡核苷酸是将23,24,25分别掺到寡核苷酸的不同位置而得并经MALDI-TOF确证.Tm值测量结果表明,五条杂寡核苷酸能与互补的DNA链杂交,但稳定性略有下降.其中异核苷掺到寡核苷酸链的两端,杂交能力较强,稳定性较好;而异核苷掺到中间时,杂交能力下降较多.原因是异核苷在寡核苷酸中间时,寡核苷酸的构象发生了较大的变化.但是羟基游离的异核苷与带烯丙基的异核苷的掺入对寡核苷酸的影响没有明显区别.RNase H实验表明5条杂寡核苷酸都能激活RNase H切割靶RNA,尤其是掺入烯丙基异核苷的杂寡核苷酸具有更强的激活能力,这可能是烯丙基的引入使得DNA/RNA双链呈A-B螺旋构象,小沟区更容易被RNase H接近.这为进一步研究化学修饰的寡核苷酸激活RNase H提供了有益的思路.
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