【摘 要】
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本文运用HPLC法、HPCE法、ESI-MS法、MALDI-TOF-MS法、LC-ESI-MS/MS法、电泳法、免疫分析法对rhPTH1-34的一级结构和质量进行较全面的研究.内容如下:用异硫氰酸苯酯(PITC)柱
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本文运用HPLC法、HPCE法、ESI-MS法、MALDI-TOF-MS法、LC-ESI-MS/MS法、电泳法、免疫分析法对rhPTH1-34的一级结构和质量进行较全面的研究.内容如下:用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生化HPLC法测定了rhPTH1-34的氨基酸组成,结果实验值与理论值一致,偏差小于10﹪,本法准确、可靠、重现性好.采用HPLC法和HPCE法分析了rhPTH1-34的胰蛋白酶酶解肽图和V8蛋白酶酶解肽图,确定了水解条件和色谱条件.结果样品肽图与对照品一致.首次采用LC-ESI-MS/MS法测定了rhPTH1-34胰蛋白酶和V8蛋白酶酶解质量肽谱,确定了肽段的氨基酸序列,从而获得整个多肽的氨基酸序列.该序列与文献报道一致.通过对流动相的种类、组成、乙腈浓度变化、柱温和流速的优化,建立了专属性高、灵敏度好的HPLC肽含量及有关物质测定方法.用Edman化学降解法测定了rhPTH1-34 N端15个氨基酸序列,用化学方法测定了C端2个氨基酸序列.测得序列与文献报道一致.采用Trise-tricine SDS-凝胶电泳法和等电聚焦平板电泳法测定了rhPTH1-34的纯度、分子量和等电点;采用免疫印迹法进行鉴别;用免疫学方法和SDS-PAGE法测定了宿主菌蛋白残留量;用"southern blot"法测定了宿主细胞DNA残留量.通过测定UMR-106-01成骨细胞株中cAMP浓度的变化而建立了rhPTH1-34的生物效价测定方法.
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