【摘 要】
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目的 克隆大鼠心肌SCNSA基因5’端调控区+204bp～+757bp及其内部共4个DNA片段，检测其在HEK293细胞系和大鼠心肌H9C2细胞系中的转录活性。 方法 采用经典PCR方法和化
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目的
克隆大鼠心肌SCNSA基因5’端调控区+204bp～+757bp及其内部共4个DNA片段，检测其在HEK293细胞系和大鼠心肌H9C2细胞系中的转录活性。
方法
采用经典PCR方法和化学合成法获得成年大鼠心肌SCN5A基因内含子1中+204bp～ +757bp、+204bp～+385bp、+204bp～+329bp和+204bp～+241bp的DNA序列，构建4个含目的片段的荧光素酶报告基因-pGL3-P0、pGL3-P1、pGL3-P2和pGL3-P3，转染HEK293细胞系和H9C2细胞系，同时选用pSV-β-半乳糖苷酶表达质粒为内参照，评价4个DNA序列在两种细胞中的转录调控活性。
结果
成功构建成年大鼠心肌SCNSA基因5’端个片断的荧光素酶报告基因，各个重组质粒在HEK293细胞中的相对荧光素酶活性为：pGL3-P1>pGL3-P2>pGL3-P0，pGL3-P2和pGL3-P3在统计上无明显差别；在H9C2细胞中的荧光素酶活性为：pGL3-P2>pGL3-P1>pGL3-P3>pGL3-P0。
结论
大鼠SCN5A基因中含子1中+204bp～+757bp、+204bp～+385bp、+204bp～+329bp和+204bp～+241bp在H9C2细胞中转录活性均明显高于在HEK293细胞中的转录活性；大鼠SCN5A基因+329bp～+385bp在HEK293细胞中表现为正性调控序列，在H9C2细胞中则表现负性调控能力，生物信息学软件分析此区域包括MZF1、USF、c-ETs-1等因子的结合序列；大鼠SCNSA基因内含子1中+241bp～+329bp和+329bp～+385bp片段参与基因的转录调控。
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