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从原位生长的肿瘤到转移的肿瘤这个转变,即肿瘤转移,是肿瘤发生过程中最危险的变化。它包含许多为完成肿瘤转移而进行的一系列复杂事件。这个过程与很多基因的表达相关,这些基因的表达使得癌细胞具有了很多与正常细胞不同的特性。较早的研究发现内源选择素(endogenous lectins)在高转移的恶性肿瘤表面具有较高的表达,而半乳糖基转移酶(galactosyltransferase)也在高转移的鼠源恶性肿瘤细胞膜上表现出了较高的活性,同时非转移和转移肿瘤细胞表面糖基的唾液酸化程度也有所不同。后来的研究发现肿瘤的生长和转移与多种生长因子及其相应的细胞表面受体有关,如血管内皮生长因子及其受体(VEGF/VEGFR)、表皮生长因子及其受体(EGF/EGFR)、血小板衍生生长因子及其受体(PDGF/PDGFR)等。一些细胞表面表达或分泌的与细胞外基质相关的蛋白或酶对肿瘤的转移也起重要作用,如基质金属蛋白酶家族(Matrixmetalloproteinases,MMP),乙酰肝素酶等。近年来,有许多证据表明,一种新的蛋白人再生肝脏磷酸酶hPRL-3在肿瘤转移中起到十分重要的作用。尽管已经发现了hPRL-3与癌细胞转移的相关性,但对其如何导致癌细胞转移的分子机制认识的还不够,因此研究hPRL-3在肿瘤转移中的作用对于肿瘤转移机制的研究以及肿瘤转移抑制药物的开发具有十分重要的意义。
噬菌体展示技术是一种用于筛选和改造功能性多肽、蛋白质强有力的生物技术,广泛应用于生命科学的许多领域,特别是噬菌体表面展示技术在蛋白质相互作用方面的成功应用,为筛选新的结合蛋白提供了一种简单、有效的手段。噬菌体展示技术能够有效地筛选和扩增生物大分子配体,通过多轮的噬菌体展示筛选和测序可以获得能与靶分子特异结合的短肽序列。目前噬菌体展示技术的研究进展非常迅速,在抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、多肽药物的研制等生物技术研究的不同领域得到了应用,并对这些领域产生了深远的影响。
参考了许多对蛋白质进行特异性短肽筛选的方法之后,我们在本研究中建立了一种有效的筛选hPRL-3结合肽的方案。我们把带有his-tag的GFP蛋白作为负筛选过程中的吸收体,用随机12肽噬菌体库对同样带有his-tag的hPRL-3蛋白表面进行差异筛选,并得到特异于人再生肝脏磷酸酶hPRL-3的噬菌体克隆。而且,为了证明筛选到的短肽对hRPL-3蛋白酪氨酸磷酸酶活性的影响,我们建立了hPRL-3蛋白酶活性试验,并且证明了筛选到的短肽对hPRL-3的酶活性有激活作用。为了进一步研究筛选到的多肽对hPRL-3的生物学功能产生的影响,我们建立了划伤愈合试验和细胞黏附试验。我们的试验为研究肿瘤转移提供了新的途径。