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脂肪酸结合蛋白(Fatty acid binding proteins,FABPs)属于胞内脂质结合蛋白超家族成员,广泛存在于脊椎动物及无脊椎动物中,能与游离脂肪酸和疏水配基结合,是动物细胞内运输脂肪酸的重要蛋白,并对脂类的代谢具有调控作用。从本实验室斜纹夜蛾中肠EST(Expressed sequence tag)文库中找到6种不同的脂肪酸结合蛋白(slfabp)cDNA。本论文对它们的克隆、表达、及功能进行了初步的研究。通过对Slfabp的研究,可以为分子抗虫药的研制提供理论依据。取得的主要研究结果如下:
(1)6个Slfabp基因Slfabp1、Slfabp2、Slfabp3、Slfabp4、Slfabp5和Slfabp6编码氨基酸的个数分别是131、134、134、134、140和134。
(2)克隆了Slfabp1、Slfabp2、Slfabp3、Slfabp4、Slfabp6基因,分析发现,在ORF内,Slfabp1没有内含子,而Slfabp2、Slfabp3、Slfabp4、Stfabp6都由三个内含子和四个外显子组成。(3)时空表达检测结果显示Slfabp1、Slfabp2、Slfabp3、Slfabp6主要在中肠表达,而Slfabp4和Stfabp5在中肠、脂肪体、表皮中都有表达,并且6种Slfabp mRNA在虫体各个发育时期表达水平变化不同。
(4)RT-PCR检测饥饿处理6龄幼虫的结果表明,饥饿处理48小时的幼虫后,Slfabp1 mRNA 表达有所降低,而其他5种SlfabpmRNA的表达保持稳定,基本不受影响。
(5)通过大肠杆菌表达系统表达了6种SlFABP蛋白,并且纯化了SlFABP1、SlFABP3、SlFABP4、SlFABP5、SlFABP6蛋白。
(6)重组表达的SlFABP1和SlFABP6能与荧光染料1,8-ANS按1:1的比例结合。
(7)原位杂交和免疫组化的结果显示Slfabp6在mRNA和蛋白水平都在中肠专一表达,并且在进食期表达量较高;亚细胞定位显示SlFABP6蛋白在细胞质和细胞核中均有分布。