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五指毛桃是一种药食同源植物,有悠久的药食用历史,保健作用广为认可,在广东客家地区广泛使用,并且大面积种植。随着五指毛桃相关产品的深入开发,目前,对五指毛桃的主要有效成份及其功效的研究尚少,制约了其开发应用。本文通过研究五指毛桃活性物质的提取纯化工艺、抗氧化功效、抗肿瘤细胞活性,探讨了五指毛桃活性物质中主要活性成分的可能分布及其功效的关系,为五指毛桃在食品和药品方面的开发提供理论基础与技术支撑,主要结果如下:
(1)五指毛桃活性物质提取纯化的优化工艺为:以提取溶剂、提取时间、粒度、提取温度、液料比和乙醇浓度为影响因素,以提取物对DPPH·清除能力(以清除率表示)为评价指标,设计单因素试验和正交试验研究五指毛桃的最佳提取工艺。单因素试验结果表明五指毛桃的最佳提取溶剂为乙醇,最佳提取条件是:提取时间3 h,提取温度60℃,提取粒度60目,液料比1:10,乙醇浓度75%。正交试验结果表明,以提取物对DPPH·清除能力为评价指标获得的提取优化工艺参数为:乙醇浓度75%,提取粒度60目,提取温度60℃,提取时间1 h。
(2)五指毛桃乙醇提取物的抗氧化功效:五指毛桃乙醇提取物对自由基有一定的清除能力。在一定剂量范围内随剂量的增加,提取物对自由基的清除力增强,呈正相关的量效关系。分别用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取乙醇提取物,研究不同萃取相对DPPH·、超氧阴离子(O2-)的清除能力(以清除率表示)、对羟自由基(·OH)的抑制能力(以抑制单位表示)以及总抗氧化能力(以总抗氧化单位表示)和还原力(以吸光值表示)。结果表明,对DPPH·的清除率为:乙酸乙酯萃取相(81.51%)>正丁醇萃取相(61.4%)>水相(41.11%)>乙醚萃取相(19.37%)>石油醚萃取相(15.17%);对O2-的清除率为:正丁醇萃取相(36.67%)>乙酸乙酯萃取相(34.86%)>水相(25.17%),石油醚萃取相和乙醚萃取相对O2-的清除能力检测结果不明显;对·OH的抑制能力以水相最强,石油醚萃取相、乙醚萃取相和正丁醇萃取相对羟自由基的清除能力很弱;还原力的大小为:乙酸乙酯萃取相(1.076)>水相(0.932)>正丁醇萃取相(0.823)>乙醚萃取相(0.658)>石油醚萃取相(0.35);总抗氧化能力的大小为:正丁醇萃取相(64.34单位/mL)>乙酸乙酯萃取相(44.44单位/mL)>乙醚萃取相(43.00单位/mL)>提取物(17.97单位/mL)>水相(12.21单位/mL)>石油醚萃取相(3.41单位/mL)。五指毛桃乙醇提取物的活性成分主要分布在乙酸乙酯萃取相和正丁醇萃取相中。
(3)应用形态观察法、MTT法以及流式细胞仪法测定五指毛桃提取物及五指毛桃提取物不同萃取相对Hela细胞的抑制作用以及对Hela细胞凋亡的影响。结果表明,形态观察法和MTT法结果一致,五指毛桃提取物、乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相和水相对Hela细胞的抑制作用在一定条件下随时间和剂量的增加呈正相关。在0.50~1.50 mg/mL 剂量范围内,对Hela细胞的抑制作用大小依次为:乙酸乙酯萃取相>正丁醇萃取相>水相。流式细胞仪检测结果表明:提取物、乙酸乙酯萃取相的检测结果与形态观察法、MTT法结果一致,提取物和乙酸乙酯萃取相处理的Hela细胞的凋亡峰明显。而正丁醇萃取相处理的Hela细胞的凋亡峰不明显,与形态观察法、MTT法检测结果不一致。分析认为:正丁醇萃取相处理Hela细胞后细胞密度小,对Hela细胞的抑制作用可能在细胞生长前期,在细胞生长后期诱导细胞凋亡,而乙酸乙酯萃取相则在Hela细胞生长后期诱导细胞凋亡。