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[目的]Polo样激酶1(polo-like kinase1,PLK1)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,因在细胞周期中起重要作用而受到广泛关注。我们前期实验发现EBV转化淋巴母细胞中PLK1表达上调。大量研究表明PLK1在人类多数肿瘤中高表达,下调PLK1的表达可显著抑制肿瘤细胞的生长。本实验通过体外细胞实验,研究PLK1表达下调后对鼻咽癌细胞生长及侵袭等生物学行为的影响,阐明PLK1在肿瘤发生中的作用,为鼻咽癌(NPC)的靶向治疗提供理论依据。[方法]构建针对PLK1基因的干扰质粒p GPU6/GFP/Neo-sh PLK1及空质粒p GPU6/GFP/Neo-sh NC,通过lipo fectamine TM 2000脂质体分别转染鼻咽癌细胞系(CNE2),G418筛选稳定转染细胞系,荧光显微镜观察细胞内绿色荧光表达情况,q RT-PCR、Western Blot分别检测转染前后PLK1基因的m RNA及蛋白在各组细胞中的表达情况。采用CCK-8、细胞划痕、流式细胞术分析、平板克隆形成及细胞迁移侵袭等实验,观察PLK1表达改变对CNE2细胞增殖和侵袭等生物学行为的影响。[结果]1.成功建立PLK1稳定低表达的CNE2细胞系。荧光显微镜观察显示转染组携带绿色荧光的细胞数达到90%;测序结果经Pub Med在线BLAST比对显示,目的基因的干扰质粒p GPU6/GFP/Neo-sh PLK1吻合率达100%,证明载体构建成功;q RT-PCR、Western Blot检测发现转染p GPU6/GFP/Neo-sh PLK1质粒的细胞(实验组)较转染p GPU6/GFP/Neo-sh NC(阴性对照组)和普通CNE2细胞(空白组)相比,PLK1基因的m RNA转录及蛋白表达水平均明显降低,表明成功建立PLK1稳定低表达的CNE2细胞系。2.沉默PLK1表达可抑制CNE2细胞的增殖及侵袭能力。CCK8及平板克隆实验结果显示:实验组CNE2/sh PLK1较阴性对照组CNE2/sh NC及空白组CNE2相比,生长速度及克隆形成率均降低,且差异具有统计学意义(P<0.05),表明PLK1表达下调能抑制CNE2细胞的增殖。流式细胞仪检测显示:转染PLK1低表达质粒的细胞CNE2/sh PLK1较阴性对照组CNE2/sh NC及空白组CNE2相比,G2期细胞百分比明显升高,S期细胞百分比明显降低,且凋亡细胞百分比升高,表明PLK1表达下调能导致CNE2细胞发生G2期阻滞,诱导细胞凋亡。划痕实验、迁移及侵袭实验结果显示:转染PLK1低表达质粒的细胞CNE2/sh PLK1较阴性对照组CNE2/sh NC及空白组CNE2相比,迁移及侵袭能力均降低,且差异具有统计学意义(P<0.05),表明PLK1表达下调能降低CNE2细胞的侵袭能力。[结论]PLK1表达下调可抑制CNE2细胞的生长、增殖及侵袭能力。