小麦高分子量谷蛋白亚基分子长度和半胱氨酸残基数目及分布与加工品质性状关系的研究

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hnkfxwj
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作为面筋蛋白主要成分的高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)是影响小麦面粉加工品质的重要因素。小麦胚乳中,HMW-GS与低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS)主要以二硫键相互交联形成谷蛋白大聚体,构成面筋蛋白的网状骨架。一般认为,HMW-GS的分子长度和二硫键的数量与分布是影响面筋质量的重要因素,但一直缺乏直接的实验证据。本研究以HMW-GS1Dx2及1Dx5为模板,通过改造其中部重复区的长度和半胱氨酸残基的数目及分布,结合转基因方法研究突变HMW-GS对加工品质特性的影响,以期阐明小麦加工品质性状形成的分子机制,为小麦品质性状的分子改良提供理论依据和新的基因资源。  本文以1Dx2及1Dx5基因为模板,通过定点诱变的方法创制了8个编码半胱氨酸残基(Cysteine,Cys)数目及分布变异的HMW-GS基因突变体,其中添加Cys的7个,分别为1Dx2m1、1Dx2m2、1Dx2m3、1Dx2m1/2、1Dx2m1/3、1Dx2m2/3和1Dx2m1/2/3,去除Cys的1个,为1Dx5m;通过PCR结合限制性内切酶酶切连接的方法创制了9个中部重复区长度变异的HMW-GS基因突变体,包括中部重复区缩短的3个,即1Dx2Rp113、1Dx2Rp311和1Dx2Rp471,延长的5个,分别为1Dx2Rp876、1Dx2Rp951、1Dx2Rp1056、1Dx2Rp1174和1Dx2Rp1353,完整编码区序列重复的1个,为1Dx2dp。  构建了全部17个突变基因及2个对照基因(1Dx2和1Dx5)的植物表达载体,采用基因枪轰击法转化普通小麦品种科农199的1Dx2亚基缺失突变体KN2-,19个转化载体共获得528个T0代阳性转基因植株。利用SDS-PAGE方法对T2代转基因株系中目的基因的表达情况进行了检测,在所检测的376个T2代转基因株系中,214个株系有外源蛋白的表达。但未获得表达1Dx2Rp1174的转基因株系。  利用RP-HPLC和光密度分析的方法对T4代转基因株系种子的麦谷蛋白亚基各组分含量进行了分析。结果表明,大多数转基因株系的各个内源HMW-GS亚基的表达量与对照品种没有显著差异,外源亚基的表达量差异相对较大。利用近红外光谱分析仪对各转基因株系的面粉特性进行分析。转基因系的面粉蛋白含量都在10.49-13.07%之间。  测定了Cys变异转基因系面粉的谷蛋白聚合体含量(UPP,EPP,UPP%等)、SDS-沉降值(SDS-SV)、谷蛋白溶胀指数(SIG)以及面团的揉混仪及粉质仪参数。结果表明,TL1Dx2m1/2在各项测定指标中均拥有最优异的检测值,其形成时间和稳定时间分别为15.87min和10.93min,均达到对照品种KN199的4倍以上。其次为TL1Dx2m1/2/3、TL1Dx2m2、TL1Dx2m1和TL1Dx5,它们也具有较好的品质参数,形成时间和稳定时间也都在5min以上。TL1Dx2m3的品质也优于TL1Dx2,而TL1Dx2m1/3、TL1Dx2m2/3和TL1Dx5m各品质参数与TL1Dx2无显著差别。在3个Cys突变位点中,m2位点拥有最好的品质效应,其次为m1位点,m3位点的品质效应相对较弱。在突变位点组合中,m1和m2位点组合具有最好的品质效应。同时,实验结果还显示,模仿1Dx5的突变基因1Dx2m1也有较强的正向品质效应,突变亚基1Dx2m1作用接近于优质亚基1Dx5,而去除1Dx5中部重复区Cys则表现出明显的负向品质效应。实验证明HMW-GS中部重复区的半胱氨酸残基对小麦加工品质有明显的正向影响,并且这种正向影响存在明显的位置效应和累加效应。1Dx5亚基中部重复区的Cys对其优质特性起到了决定性的作用。  测定了1Dx2亚基分子长度变异转基因系面粉的UPP%、SDS-SV、SIG、揉混仪和粉质仪参数。结果发现,分子长度最短的突变基因转基因系TL1Dx2Rp113具有最好的品质参数,其形成时间和稳定时间分别为12.70min和17.17min,显著优于KN199。TL1Dx2Rp311与TL1Dx2相比也具有稍好的品质特性,而TL1Dx2Rp471的面团品质特性较差。在延长的突变基因转基因系中,TL1Dx2Rp1353的品质参数优于TL1Dx2,其它转基因系绝大部分的品质参数都显著低于TL1Dx2。实验结果说明,中部重复区长度对加工品质有正向效应,在一定分子长度范围内,中间重复区长度与品质参数存在正相关关系。
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