hRPE细胞表达整合素α的调节机制及意义研究

• 作 者: 陈震
• 机 构: 华中科技大学
• 出 处: 华中科技大学
• 发表日期: 2008年12期
• 关键词: 表皮生长因子

目的: 探讨表皮生长因子（EGF）对人视网膜色素上皮细胞（hRPE）表达整合素α5的调节及意义。
方法:
1）通过玻璃体切除术采集14例视网膜脱离病例的视网膜下膜标本，用免疫组化方法检测下膜中角蛋白，整合素α5β1及纤维粘连蛋白（FN）的表达。免疫荧光双标记法研究视网膜下膜色素上皮细胞与整合素α5β1表达的关系，荧光定量分析视网膜下膜与正常视网膜下膜组织中整合素α5β1表达的差异。
2）人视网膜色素上皮细胞原代、传代培养；分别用0ng/ml、0.1 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、100 ng/ml浓度EGF诱导hRPE；RT-PCR、免疫组化和流式细胞术观察整合素α5mRNA和蛋白的表达；MTT法检测各实验组细胞增生率，采用直径为8.5mm的Boyden小室实验进行细胞迁移能力的检测。
3）将实验分成对照组、10ng/mlEGF组和PD98059组，RT-PCR及流式细胞术观察不同实验组整合素α5 mRNA和蛋白的表达；Western blot法检测各组hRPE细胞中MAPK磷酸化水平。
结果:
1）所有14例下膜标本中整合素α5β1纤维粘连蛋白（FN）表达均呈阳性，角蛋白表达均呈阳性的细胞（即RPE细胞）的细胞膜上表达整合素α5β1，与正常视网膜组织比较表达显著增强（P<0.05）。
2) 与0ng/ml组相比，24h后1ng/ml的EGF促进人hRPE细胞中整合素α5mRNA和蛋白的表达，并呈浓度依赖性，而浓度为10～100ng/ml时促进作用达到高峰。流式细胞术检测显示：10ng/ml的EGF作用时荧光强度最强为3.98±0.67，0ng/ml和0.1ng/ml组分别为1.87±0.22，1.98±0.54（P<0.01）。MTT法检测显示：与对照组相比，EGF组及加入不相关抗体(兔抗人波形蛋白抗体)组细胞增生、迁移明显，而加入兔抗人整合素α5多克隆抗体(1:100)组较弱，与前两组相比差异有显著性（P<0.01）。
3) 与对照组相比，EGF促进整合素α5 mRNA和蛋白的表达，而PD98059(20 μmol/L)可抑制此促进作用；流式细胞术显示24h后整合素α5荧光强度分别为1.94±0.22，4.56±0.25，2.39±0.14，差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示30 min 后EGF组ERK1/2磷酸化激活水平最高，PD98059组抑制ERK1/2的磷酸化激活，对照组ERK1/2的磷酸化激活作用很弱。
结论: 在视网膜下膜组织中hRPE细胞整合素α5β1表达上调，其配体FN也显著表达，整合素α5β1与FN参与了视网膜下膜的形成。1ng/ml的EGF开始促进整合素α5mRNA和蛋白的表达，10～100ng/ml时候促进作用达到高峰，整合素α5的表达促进hRPE细胞的增生和迁移。ERK1/2的磷酸化激活参与此过程。EGF激活ERK1/2通路刺激hRPE细胞的整合素α5mRNA的表达是PVR的重要发病机制。