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目的观察NF-κB活化因子受体(RANK)及其配体(RANKL)通路对乳腺癌细胞耐药性的影响,并研究其机制。方法培养人乳腺癌野生型细胞系MCF-7及其同源的阿霉素耐药细胞系MCF7/ADR,用免疫荧光技术及Western blot检测MCF-7及MCF7/ADR中RANK蛋白表达情况;分别用50ng/ml和100ng/ml的RANKL作用于两种细胞,用Western blot检测作用前后两种细胞中乙醛脱氢酶1(ALDH1)蛋白表达情况;在100ng/ml RANKL作用下的MCF-7细胞中加入500ng/ml骨保护素OPG,用Western blot检测作用前后MCF-7细胞中乙醛脱氢酶1(ALDH1)蛋白表达情况。应用CCK-8法检测三种浓度的RANKL作用前后MCF-7细胞在阿霉素作用下的细胞存活率。构建RANK过表达慢病毒载体并感染MCF-7细胞,同时感染无义序列作为阴性对照,空白对照组不作处理。结果免疫荧光技术及Western blot结果显示,RANK蛋白在MCF7/ADR中的表达较MCF-7均明显增强(P<0.05);且MCF7/ADR细胞中ALDH1蛋白表达量明显高于MCF-7(P<0.05)。随着RANKL浓度的增高(0、50、100ng/ml),两种细胞中的ALDH1蛋白表达量和细胞存活率均有明显的剂量依赖性,出现逐步增强趋势。CCK-8法检测MCF-7细胞在不同干预的作用下细胞存活率实验中,当阿霉素的浓度为2.5μmol/L和5μmol/L时,不同干预下的细胞存活率具有明显差异,且差异具有统计学意义(P<0.05)。而RANKL抑制剂骨保护素OPG可以逆转RANK作用所引起的现象(P>0.05)。实验成功地构建了RANK过表达质粒载体并进行慢病毒包装与感染。慢病毒载体的构建为今后RANKL/RANK通路对乳腺癌MCF-7细胞阿霉素耐药分子机制的研究奠定基础。结论RANKL/RANK通路参与了乳腺癌耐药过程,且其可能通过维持肿瘤干细胞群介导乳腺癌细胞耐药。