【摘 要】
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苏云金芽孢杆菌7404、006、HDX和HD-2是该室分离保藏的4株有特异杀虫活性的野生菌株.在以往的遗传改良研究中,从未获得含有外源cry基因的转化子.该文首次建立用固体培养菌体
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苏云金芽孢杆菌7404、006、HDX和HD-2是该室分离保藏的4株有特异杀虫活性的野生菌株.在以往的遗传改良研究中,从未获得含有外源cry基因的转化子.该文首次建立用固体培养菌体代替原来的液体培养菌体诱导感受态的方法,使上述4株Bt菌获得成功的转化,转化效率为10<1>~`10<2>转化子.ug<-1>DNA.利用电子显微镜研究上述4株Bt野生菌株固体及液体培养物细胞表面结构,证明Bt细胞在固体培养条件下呈现感受态的重要标志是形成一种细胞表面层蛋白(S-layer).利用固体和液体培养物大量制备S-layer蛋白并进行SDS-PAGE分析,同样肯定了在固体培养条件下这一特异蛋白的存在.由此证明Bt中S-layer可能是一种感受态因子,对转化有重要的促进作用.论文中设计并且优化了一种大量提取S-layer蛋白的方法并确定了4株菌S-layer蛋白分子量.该文利用改进的PCR-RFLP方法对高效的Bt 15A3菌株中疑似的cry1Aa类新基因进行了鉴定,实验结果证明此基因与已知的基因没有显著差异.
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