【摘 要】
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该研究首先通过PCR将家蚕杆状病毒多角体蛋白起始密码子后的18个碱基引入到hGM-CSF基因的5端之前,然后将融合基因重组与家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,获得重组转移载体pBa
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该研究首先通过PCR将家蚕杆状病毒多角体蛋白起始密码子后的18个碱基引入到hGM-CSF基因的5端之前,然后将融合基因重组与家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,获得重组转移载体pBacPAK8-6aa-hGM-CSF,并与线性化Bm-BacPAK6DNA共转染家蚕细胞株,获得重组病毒BacPAK-6aa-hGM-CSF.PCR和Southern杂交结果表明重组病毒基因组中含有6aa-hGM-CSF基因.重组病毒以MOI=10感染家蚕细胞(2×10<6>个细胞/5ml),以MOI=5接种家蚕5龄幼虫,结果发现:1、采用GM-CSF依赖细胞株TF-1和MTT比色法测定表达产物的生物活性,细胞内表达产物、家蚕幼虫和蚕蛹体液都具有较高活性,而阴性对照和空白对照无活性.说明了重组病毒在细胞内、家蚕幼虫和蚕蛹体内得到了成功表达,并且具有活性.2、通过对表达产物生物活性测定,细胞内表达量为31.98mg/L,蚕血淋巴表达量为210.9mg/L,蚕蛹内表达量为37.56mg/L.3、通过对表达产物ELISA检测和MTT比色法检测,发现两者在确定表达量方面存在很大差异,因此推测可能与蚕体内的糖基化有关.4、合前后表达产物的ELISA测定和生物活性测定比较,融合后产物在表达量增加10﹪情况下,生物活性并升高,推测可能与hGM-CSF的空间结构有关.
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