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目的:观察HMME-PDT光动力疗法对兔颈动静脉内瘘(Arteriovenous Fistula, AVF )静脉内膜增生及血管平滑肌细胞(Vascular Smooth Muscle Cell,VSMC)凋亡、增殖的影响。
方法:利用显微外科技术于兔右颈部建立颈总动脉-颈静脉端侧吻合AVF模型32例,随机分为4组:空白对照组(n=8只),单纯光敏剂组(n=8只),单纯光照组(n=8只),光动力治疗组(n=8只)。术后彩色多普勒超声检查吻合口通畅情况及血流频谱,术后30天截取AVF吻合口静脉端血管组织,利用HE染色、Masson染色检测各组内中膜厚度及管腔面积;利用免疫组织化学染色检测增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)、α-SMA、Caspase-3的表达分布;利用Westernblotting技术检测PCNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白在各组中的表达量。
结果:彩色多普勒超声检测结果显示,颈静脉与颈总动脉吻合成功;频谱多普勒检测结果显示AVF吻合口血流呈现“彩色血流”,吻合口血流呈类动脉血流频谱,其血流频谱同临床动静脉内瘘频谱。HE染色、Masson染色结果显示,光动力治疗组血管管腔较其余三组明显增大,各组组织内中膜厚度均有不同程度增加,统计结果表明光动力组血管内中膜厚度较其余三组明显减轻(P<0.05)。免疫组织化学染色统计结果表明光动力组PCNA、α-SMA表达较其余三组明显降低(P<0.05),Caspase-3表达较其余三组明显增加(P<0.05)。PCNA、α-SMA、Caspase-3的Westernblotting统计结果与免疫组织化学染色统计结果相符;Caspase-9、BaxWesternblotting统计结果表明,光动力组Caspase-9、Bax表达较其余三组明显增加(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达较其余三组明显增降低(P<0.05)。统计分析表明光动力组Bcl-2/Bax比值较其余三组明显降低(P<0.05)。
结论:兔颈AVF模型与临床AVF相似性好,是研究AVF可行的模型。HMME-PDT光动力疗法能够有效减轻兔AVF内中膜增生。HMME-PDT光动力疗法通过Bcl-2/Bax凋亡途径促进VSMC凋亡,抑制VSMC增殖,从而达到抑制动静脉内瘘内膜增生的效果。
方法:利用显微外科技术于兔右颈部建立颈总动脉-颈静脉端侧吻合AVF模型32例,随机分为4组:空白对照组(n=8只),单纯光敏剂组(n=8只),单纯光照组(n=8只),光动力治疗组(n=8只)。术后彩色多普勒超声检查吻合口通畅情况及血流频谱,术后30天截取AVF吻合口静脉端血管组织,利用HE染色、Masson染色检测各组内中膜厚度及管腔面积;利用免疫组织化学染色检测增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)、α-SMA、Caspase-3的表达分布;利用Westernblotting技术检测PCNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白在各组中的表达量。
结果:彩色多普勒超声检测结果显示,颈静脉与颈总动脉吻合成功;频谱多普勒检测结果显示AVF吻合口血流呈现“彩色血流”,吻合口血流呈类动脉血流频谱,其血流频谱同临床动静脉内瘘频谱。HE染色、Masson染色结果显示,光动力治疗组血管管腔较其余三组明显增大,各组组织内中膜厚度均有不同程度增加,统计结果表明光动力组血管内中膜厚度较其余三组明显减轻(P<0.05)。免疫组织化学染色统计结果表明光动力组PCNA、α-SMA表达较其余三组明显降低(P<0.05),Caspase-3表达较其余三组明显增加(P<0.05)。PCNA、α-SMA、Caspase-3的Westernblotting统计结果与免疫组织化学染色统计结果相符;Caspase-9、BaxWesternblotting统计结果表明,光动力组Caspase-9、Bax表达较其余三组明显增加(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达较其余三组明显增降低(P<0.05)。统计分析表明光动力组Bcl-2/Bax比值较其余三组明显降低(P<0.05)。
结论:兔颈AVF模型与临床AVF相似性好,是研究AVF可行的模型。HMME-PDT光动力疗法能够有效减轻兔AVF内中膜增生。HMME-PDT光动力疗法通过Bcl-2/Bax凋亡途径促进VSMC凋亡,抑制VSMC增殖,从而达到抑制动静脉内瘘内膜增生的效果。