【摘 要】
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由水稻黄单胞菌引起的水稻白叶枯病是水稻最严重的细菌性病害。通过对突变体库中约18，000个Xoo Tn5转座子插入突变体的筛选和用TAIL—PCR方法分离转座子插入位点的侧翼序列得
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由水稻黄单胞菌引起的水稻白叶枯病是水稻最严重的细菌性病害。通过对突变体库中约18，000个Xoo Tn5转座子插入突变体的筛选和用TAIL—PCR方法分离转座子插入位点的侧翼序列得到4个hpa基因的突变体。
hpaB基因的突变体XoG11表现为致病力的缺失，进一步的分析表明该基因编码一个含有156个氨基酸，等电点为4.28，亮氨酸含量为14.4％的蛋白HpaB。Southernblotting和PCR验证表明Tn5在该突变体中为单拷贝插入且未发生转座子携带侧翼序列的转移。将hpaB克隆到具有广泛寄主的质粒pHM1中，转化重组质粒进入突变体后，突变体恢复了其在寄主水稻IR24中的致病力，而转化空质粒pHM1后的突变体仍然表现为致病力缺失。研究首次证实了水稻黄单胞菌中hpaB基因与该细菌的致病力相关，在侵染寄主水稻的过程中起着重要的作用。
hpaA基因的突变体X073，XoC10，XOC12则表现为致病力减弱。同样对突变体进行了Southern blotting和PCR验证。hpaA基因编码275个氨基酸，只在黄单胞菌属中具有较高的相似性，预测含有两个核定位信号。利用GatewayTM位点特异重组技术，构建了hpaA基因的表达载体，得到了高表达量的菌株，通过Ni—NTA纯化蛋白并通过免疫兔子制备了HpaA的抗体，且HpaA蛋白在蛋白变性复性过程中极易形成四聚体。另外已将hpaA和hpaA-myc构建到过量表达的pHM1质粒中，为下一步工作奠定了基础。
hpaP基因的突变体XOSB11则表现为细菌致病力降低，过量表达载体pHM1-hpaP的遗传互补实验发现仅能部分恢复致病表型，说明转座子的插入不仅破坏了该基因，且可能对下游基因产生了影响。同样构建了hpaP的表达载体，且分离纯化HpaP蛋白得到了该蛋白的多克隆抗体。
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